3-4、溶菌酶的制备实验.pptVIP

溶菌酶的制备（3-4）8学时 溶菌酶的性质 生产方法 溶菌酶的作用机理 溶菌酶的用途 溶菌酶的特点（优点） （1）溶菌酶是很稳定的蛋白质，有较强的抗热性。蛋清溶菌酶是C型，是已知的最耐热的酶； （2）溶菌酶不会因为有机溶剂的处理而失活，当转移到水溶液中时，溶菌酶的活力可全部恢复； （3）溶菌酶可被冷冻或干燥处理，且活力稳定； （4）溶菌酶适宜pH5.3~6.4，可用于低酸性食品防腐； （5）溶菌酶生产成本较低； （6）溶菌酶的抗菌谱较广，不仅局限于G+ 菌，对部分G- 菌也有抑制效果； （7）溶菌酶作为防腐剂安全性高。溶菌酶是一种天然蛋白质，1992年FAO/WTO 的食品添加剂协会已经认定溶菌酶在食品中应用是安全的。 实验目的 掌握从蛋清中分离提取溶菌酶的工艺和方法； 了解溶菌酶的物理化学性质； 主要仪器设备和药品 （1）耗材：pH试纸、500mL烧杯、100mL烧杯、玻璃棒、60-80目筛子、200mL量筒、滤纸、布氏漏斗、抽滤瓶、透析袋、pH试纸碱性、pH试纸酸性、50mL离心管 （2）试剂：鸡蛋5个、724树脂50g、磷酸二氢钾、氢氧化钠固体、硫酸铵、浓盐酸、固体氯化钠、丙酮、磷酸二氢钾 （3）仪器设备：电动搅拌器、冰箱、真空泵、真空干燥箱 （4）溶液配制： 1）0.15mol/L（pH6.5）磷酸缓冲液：取磷酸二氢钾6.8g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液152mL，用水至1定容到1L，即得；每组150mL。 2）0.1mol/L氢氧化钠溶液：4g氢氧化钠固体放入烧杯中,用800mL左右蒸馏水溶解，冷却后用蒸馏水定容至1L，即得；每组160mL。 3）10%硫酸铵溶液：称取无水硫酸氨100g，用800mL水溶解，用蒸馏水定容至1L，即得；每组200mL。 5）1mol/L氢氧化钠溶液：40g氢氧化钠固体放入烧杯中,用800mL左右蒸馏水溶解，冷却后用蒸馏水定容至1L，即得。 6）3mol/L盐酸溶液：量取100mL浓盐酸加入300mL水中，混合均匀即得。 实验方法 原料处理 吸附 去杂蛋白 洗脱 沉淀 干燥 盐析 透析 方法步骤 1）制备蛋清：将4～5个新鲜的鸡蛋两端各敲一个小洞，使蛋清流出（鸡蛋清pH值不得小于8），轻轻搅拌5分钟，使鸡蛋清的稠度均匀，用铜筛过滤除去脐带块等其他杂质，量体积约为100mL。 2）吸附：温度降至5 ℃左右，边搅拌边加入处理好的724树脂50g（湿重），使树脂全部悬浮于蛋清中。保持0-5摄氏度，搅拌吸附5h，将蛋清在0-5 ℃静置过夜。 3）去除杂蛋白：把上层清液渐渐倒出，下层树脂用清水洗去吸附的蛋白质，反复4次，将树脂抽滤去水分。 4）洗脱：取0.15mol/L（pH6.5）磷酸缓冲液150mL，分3次加入树脂中，搅拌约为15min，每次搅拌后减压抽滤去水分；用10%硫酸铵200mL，分4次洗脱溶菌酶，每次搅拌30min，过滤抽干，合并洗脱液，按总体积加入32%（质量体积比）固体硫酸铵使含量达到40%，有白色沉淀产生。冷却放置过夜，弃上清，沉淀离心分离（或抽滤），得粗制品。 5）透析：将粗制品溶解于50ml蒸馏水，装入透析袋，0-5 ℃透析24-36h。