利用RNA干扰技术干扰HBeAg表达的研究.pdfVIP

·126· 《现代免疫学)2008年第28卷第2期 利用RNA干扰技术干扰HBeAg表达的研究 汪光蓉1’3，张国元1，杨健2，唐 中1，唐恩洁2，朱道银3 科大学免疫微生物学教研室，重庆400016) 摘要：构建针对乙肝病毒HBeAg前c／c区(HBV tuRNA的转录情况。随后用水动力学方法。向小鼠尾静脉注射pHBVl．5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型。采用此感 C 肝内HBV 应用前景。 关键词：乙型肝炎；shRNA；RNA干扰；动物模型 中图分类号：R373．21 文献标志码：A 文章编号：1001—2478(2008)02—0126—06 乙型肝炎(hepatitisB，HB)是困扰全世界公亚型乙肝病毒1．5倍基因组全长基因)(本室保存)。 众健康的疾病，对我国危害尤为严重，慢性感染者 高达9．8％。虽然重组干扰素、核苷酸类似物(拉 究所任红教授惠赠)。 米呋啶)对治疗乙型肝炎有一定效果，但有相当比 1．1．2 主要试剂 各种限制性内切酶和PCR反应 例的病人在治疗过程中出现耐药或停药后复 体系，cDNA合成试剂盒，购于立陶宛MBI公 in— 发[1~3]，治疗效果不够满意。RNA干扰(RNA司；连接试剂盒为Promega公司产品；质粒大量 marker terference，RNAi)作为一种新的特异性抑制基因抽提试剂盒购自QIAGEN公司；DNA 表达的技术，为乙型肝炎等病毒性疾病的治疗提供 molecularmarker 了新思路[4]。实验研究分别从细胞水平和机体水平 于华美生物有限公司；PCR (bp)：2000、1 观察了siRNA在体内外对HBV复制和表达的抑 制作用，为今后用RNAi技术基因治疗乙型肝炎提宝生物大连有限公司，RNA提取用TRIzol购自 供了基础。 Invitrogen公司；各种引物均由上海生工合成。 1．1．3 动物 4～5周龄雄性BALB／e小鼠(四川 1材料与方法 大学华西医学中心动物实验中心提供)22～25 g， 1．1 材料 清洁无菌喂养。取18只用于建立动物模型，其余 1．1．1 质粒和细胞 含人类U6启动子的质粒 随机分成5组，每组6只。A组空白对照组，只注 pTZU6+1(美国贝克曼研究所分子生物学研究室射PBS缓冲液；B组为感染组，注射pHBVl．5； JohnRossi教授惠赠)；质粒pHBVl．5(含有adw 录载体psiHBV4；D组为空载体对照组，共同注 收稿日期：2007—10-09；修回日期：2008—02—20 共同注射pHBV]．5和无关干扰载体psiC。 基金项目：四川省教育厅重点课题资助项目(04JY一029—015) 1．2方法 作者简介：汪光蓉(1977一)，女，讲师，硕士，E-mail：wangwan9316 @sim．coin 1．2．1针对HBV核心区的siRNA转录栽体及针 利用RNA干扰技术干扰HBeAg表达的研究 对HBV核心区的无关干扰序列转录载体(psiC)的向序列，两端均添加上XhoI和XbaI酶切位点， 构建及鉴定根据ambion公司在线设计软件，针 对HBV前e／c基因序列设计以下3对寡核苷酸靶GAGA，并用BLAST软件进行同源性分析。