实验一 磺胺嘧啶在体小肠吸收实验.pptVIP

实验一 磺胺嘧啶在体小肠吸收实验 ; 一、实验要求 ; 二、仪器、试剂和动物 ; 二、仪器、试剂和动物 ;消化道药物吸收的主要方式为被动扩散。其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示： Cp相对于CGI可忽略不计，若设DkS/h=k’上式可简化为 上式说明药物膜透过速度属于表观一级速度过程。;Xn的求算 Xn=Cn×Vn 在小肠吸收过程中，药物被吸收的同时水分也被吸收，使Vn不断减少，利用酚红不被吸收，测定不同时间酚红的浓度，求算Vn。;四、实验内容 ;2．供试液与酚红液的配制（已准备） (1)供试液：精密称取磺胺嘧啶20mg、酚红20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。 (2)酚红液：精密称取酚红20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。;3．循环实验的操作 (1)蠕动泵流速的调节：选择所需工作方向，按动快、慢档开关，调节流速为5mL/min和2.5mL／min。 (2)恒温水浴调节：水浴温度调节为（37±0.5）℃。 (3)供试液的准备：取80mL供试液加入循环装置的烧瓶中，见下图，将烧瓶置恒温水浴中预热至（37±0.5）℃。 (4)生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37℃备用。 ;(5)大鼠麻醉：取实验前禁食一夜、体重约为200g的雄性大鼠一只，按1.2g／kg体重腹腔注射乌拉坦（约0.8mL）麻醉，并固定于固定台上。;(6)小肠两端插管：沿大鼠腹部中线打开腹腔(约3cm)，在十二指肠上部和回肠下部各切一小口，插入直径约0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。;(7)肠管洗涤：用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗净肠管内容物。 注意： 先将肠管捋顺，确保无死结； 推注时不要太快，以免涨破肠管； 充分洗净后送入空气使洗涤液尽量流尽。;(8)做成回路：将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管连接，做成回路，开动蠕动泵，其流速为5mL/min。;;(9)取样：以5mL/min流速循环10min后，将流速调节为2.5mL/min，立即自供试液烧瓶中取样两份(1mL和0.5mL各一份)，分别作为SD和酚红“0”时间样品，另向烧瓶中补加酚红液2mL，其后每隔15min按同法取样及补加酚红液，共取样9次，停止循环。;4．含量测定 （1）SD的标准曲线：取供试液2、4、6、8、10mL分别置l0mL容量瓶中，加蒸馏水定容。;（2）酚红的标准曲线：精密称取酚红约25mg置250mL容量瓶中，加蒸馏水定容，分别精密吸取1、2、3、4、5、6mL置10mL容量瓶中，加蒸馏水定容，再分别吸取0.5mL置10mL带塞试管中，加0.2mol/LNaOH 5mL，摇匀。照分光光度法在555nm波长处测定吸收度。以吸收度对浓度回归，得到酚红标准曲线方程。;(3)样品测定 ①SD的测定：取样品lmL置l0mL带塞试管中，加入lmol/L盐酸5mL，摇匀，以下步骤按SD标准曲线项下操作，在550nm的波长处测定吸收度。 ②酚红的测定：取样品0.5mL置10mL带塞试管中，加入0.2mol／L NaOH 5mL，在555nm波长处测定吸收度。;5．操作注意 (1)在大鼠麻醉前应做好一切准备工作。如手术器械、水浴温度的调节，试药配制并放在近处，蠕动泵流速调节等。如果蠕动泵上并未标出流速，可用量筒接流出液（蒸馏水）的方式确定流速。 (2) 小肠很细，小肠两端插上玻璃管后再洗涤非常容易堵塞，应先将十二指肠端插上玻璃管，回肠端找好后先用线扎紧，然后在扎线处切个小口。生理盐水(37℃)从十二指肠端插管处注入，洗涤内容物至净，再在回肠端切口处插上玻璃管。;5．操作注意 (3)插玻璃管时应注意方向，在十二指肠端向下插，回肠端向上插，以构成回路。 (4)SD的测定中，加入氨基磺酸钠后要充分振摇至无气泡发生。; 五、实验结果 ;大鼠在体小肠吸收量的计算 ;六、问题与讨论