文娟课件2003版.ppt

无创产前检测指征 高龄（年龄≥35岁），不愿选择有创产前诊断的孕妇； 唐筛结果为高风险或者单项指标值改变，不愿选择有创产前诊断的孕妇； 孕期B超胎儿NT值增高或其它解剖结构异常, 不愿选择有创产前诊断的孕妇； 具有创产前诊断禁忌症的孕妇，如病毒携带者、胎盘前置、胎盘低置、羊水过少或过多、RH血型阴性、流产史、先兆流产或珍贵儿等； 羊水穿刺细胞培养失败不愿意再次接受或不能再进行有创产前诊断的孕妇； 希望排除胎儿21三体、18三体、13三体综合征，自愿选择行无创产前检测的孕妇。 ? 有创产前诊断 1.绒毛膜穿刺（ 孕10周-13周+6） 2.羊膜腔穿刺（孕16周-22周+6） 3. 脐静脉穿刺（18周之后） 4. 胎儿镜检查（根据检查目的确定检查时间） 有创产前诊断指征 1、夫妇双方家系中曾出生过有染色体病和基因组病患儿的孕妇； 2、既往有生育智力低下、多发畸形、发育迟缓患儿的不良孕产史的孕妇； 3、孕期曾接触过可能导致胎儿先天缺陷的物质（如放射线、毒物、化学药剂、微生物等）的孕妇； 4、希望通过一次性检测排除染色体异常和基因组异常所致的严重致愚、致残、致死性遗传病的孕妇（发生率达2-3%）。 5、可疑有单基因病或有单基因病家族史的孕妇。 羊膜腔穿刺（ amniocentesis） 羊水细胞主要来自胎儿的皮肤、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道或羊膜内层（表皮细胞、羊膜细胞、未分化细胞、吞噬细胞等），可用于核型分析、DNA诊断,羊水则可用于生化分析。 人羊水细胞培养及染色体制备 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养（50代），羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞，根据细胞形态和生长特征分为三类：上皮样细胞（E）、成纤维样细胞（F）和羊水细胞（AF）。 E细胞：呈致密生长，细胞集落边界清晰，在胰酶消化的连续培养中不再生长，仅在原代培养时可见到，生长期最短。 AF细胞：呈鸟眼状，不同的孕妇的羊水中细胞体积可变化。 F细胞：呈梭型，生长期最长，细胞分裂旺盛，在较老的羊水培养物中占优势。 三种细胞的生长特性 细胞接种 在无菌条件下抽得3-4管（约20-30ml）羊水后，注入10ml离心管中，立即送检； 1500rpm，室温离心10min； 在无菌操作台上吸去上清液，每管约留0.5ml，吸管打散细胞。制成细胞悬液，再加入约4.5ml完全培养基入管内，吸管吹打，尽量将细胞打散，移至25cm2方形培养瓶中置含5%CO2的37℃温箱行开放式培养。 一般5-6天后镜下观察，可见成纤维样或上皮样细胞生长，当细胞生长旺盛，在贴壁细胞层的背景上出现圆形细胞时，视情况换液，继续培养24-48小时，如细胞生长状况好，细胞密度适中，即可加入秋水仙素0.04ug-0.08ug/ml(20ug/ ml) ，4-6小时左右行细胞学处理。 细胞培养 细胞收获 吸出瓶中细胞液入10ml离心管，生理盐水冲洗细胞壁两遍； 0.25% EDTA-trypsin消化3-5分钟，待细胞面出现肉眼可见皱形改变时即用吸管吹打细胞，直至全部脱落； 收集细胞悬液：1500rpm，室温离心10min，去上清； 低渗：加入0.075M KCl 6ml-7ml，吸管吹打，37℃水浴5min-10min; 预固定：加入1.5ml左右3:1固定液，轻混匀,37℃水浴5min,1500rpm,室温离心10min； 固定：加入3:1固定剂8ml左右，轻混匀，37℃水浴10min； 1500rpm,室温离心10min ，去上清，约留0.5ml； 重复固定：同上； 1500rpm，室温离心10min，去上清； 调悬液：视管底细胞量加入几滴新鲜固定剂，并吹打混匀; 滴片：每片1-2滴, 滴片4-6张; 烤片：75℃烤箱烘烤3小时; 第二天行显带处理：同外周血。 注意事项 在抽取羊水前先引导孕妇做超或翻身，使胎儿脱落细胞悬浮在羊水中； 羊水标本应及时送检，送检过程中不宜受热或冰冻，实验人员收到羊水后应先观察羊水是否清亮，含胎脂的多少及是否为血性羊水；羊水中少量红细胞不需处理； 离心时，一定要注意离心机内温度，必须达到室温方可离心； 接种细胞密度很重要，离心后应根据细胞沉淀来决定几管接种一瓶； 羊水培养首先必须有好的培养基，培养基pH为7.2-7.4也是羊水细胞开放式培养成功的关键； 注意接种时培养基不能加得过多，卧倒瓶子时，培养基不能接触瓶盖； 抓住细胞生长旺盛时期相当重要，如羊水为血性羊水或胎质较多须给予不同的处理。 绒毛膜穿刺 绒毛膜穿刺术(CVS） 绒毛组织位于胚囊之外且又具有和胚胎同样的遗传性，故早孕期绒毛活检被广泛