第七章 青霉素发酵.pptVIP

第七章 青霉素发酵 ;第一节 青霉素生产和市场;;第一节 青霉素生产和市场;据不完全统计（世界）： 6-氨基青霉素烷需求量约为2.6万吨，2005年将达到3.3万吨； 7-氨基脱乙酰氧基头孢烯酸需求量约6000吨，2005年为7000吨。　?; 据国际抗生素协会估计，到21世纪初期，国际青霉素原料药市场仍将维持目前价格，而不可能回到八十年代初期27～36美元/Kg高价位。 但青霉素及氨苄青霉素粉剂因受成本影响，目前销售价格已经回升。 ;我国青霉素具有竞争力： 　　　90年代，青霉素价格出现两次暴跌，1996～1997年青霉素第二轮降价迫使西方生产商退出市场，多数中国和印度生产商受到政府支持，度过市场动荡这一难关。 　　　西方厂商未来将转向生产青霉素干粉原料为主。;　　　据估计，中国和印度生产的青霉素原料目前占世界市场25～30%，印度成为中国出口青霉素最大竞争对手。; 1996年迅速扩展，全球青霉素原料药年产销量4万吨左右，中国占到30%； 1999年青霉素工业钾盐生产能力已占世界生产能力4万吨的35.29%； 2000年，七种青霉素系列产品均呈现增长趋势，其中哌拉西林增长了267%，以6-APA为中间体的阿莫西林增长69%，产量近2000吨。 ;国内生产现状： 据统计，青霉素G钠原料，华药、石家庄制药、鲁抗、哈药四家所占份额已由1999年89%上升到2000年91.2%。 　　目前我国年发酵能力1.5万吨以上。其中，华北制药3200吨，哈药2100吨，鲁抗1290吨；年发酵能力超过1000吨企业还有四川制药、河北制药、张家口制药等。;第二节 青霉素发酵菌株及其选育 ; 青霉素生产菌按其在深层培养基中菌丝形态不同分为丝状菌和球状菌。 丝状菌按其孢子颜色又分为黄孢子丝状菌和绿孢子丝状菌； 球状菌按其孢子颜色分为绿孢子球状菌和白孢子球状菌。 球状菌发酵单位虽高，但对原材料和设备要求高，提取收率低于丝状菌。所以，目前生产大多采用绿色丝状菌。; 2.菌株选育 以产黄青霉NW1951为出发菌株，经自发突变、X射线、UV诱变，得到生产能力较高突变株WISQ-176（1000～1500u/ml）。 但该菌株产生较多色素，不利于提取。后来经多次自然选育、氮芥等处理，得到不产色素的变种WIS51-20。;青霉素产生菌的改良（引自陈守文） S：自发突变，X：X射线，UV：紫外线，NM：氮芥; 目前各国采用的生产菌株多为该变种的后代，青霉素发酵单位达6～7万u/ml。 随着生物工程发展，目前还应用杂交育种，原生质体融合及DNA重组技术定向选育优良高产菌株。 ; 从菌株选育的全过程看，青霉素选育工作的目的，除了提高青霉素产量外，在生长条件、不产色素、对前体苯乙酸耐受性、细胞内积累硫酸盐能力、同化碳水化合物和前体能力、对铁敏感性，以及提高青霉素酰化酶活力等也有改进。 ;3.青霉菌生长发育阶段;2).青霉素分泌期 菌丝生长趋势减弱。间隙添加葡萄糖、花生饼粉、尿素和前体，青霉素分泌旺盛。 菌丝球——不可太松、太紧；发酵液pH6.6～6.9； 丝状菌——细胞内脂肪粒消失，空胞为中、小型；pH6.2～6.4。 此时应注意适时放罐。;3).菌丝自溶期 菌体衰老自溶。 球状菌——开始破裂，且比例迅速增加； 丝状菌——大型空胞增加并扩大自溶。 此时，停止分泌青霉素，发酵液pH上升，青霉素含量下降。 因此，发酵过程中，应缩短菌丝生长繁殖期，尽量延长青霉素分泌期，避免出现菌丝自溶期，在菌丝自溶期出现前停止发酵，及时放罐。;第三节 青霉素发酵工艺;2.球状菌发酵工艺流程;安培管;斜面孢子;大米孢子;一级种子;菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ—Ⅳ期;1）碳源： 青霉菌能利用多种碳源，如乳糖、蔗糖、葡萄糖、淀粉、油脂等。其中乳糖对青霉素合成最为有利，但因价格高，货源少，生产上主要使用葡萄糖母液和工业用葡萄糖。 天然油脂如玉米油、豆油等也能作为有效碳源(缓慢利用)。;2）氮源： 玉米浆是最好氮源，含有多种氨基酸如精氨酸、谷氨酸、组氨酸、苯丙氨酸以及?-苯乙酸及其衍生物。 玉米浆价格高，质量不稳定，国内常以花生饼粉或棉子饼代替。 ;3）无机盐: 青霉菌胞液中含S和P，青霉素生物合成也需要S和P。S和P浓度降低时青