课件-第七章 微生物的遗传变异和育种 .pptVIP

l营养缺陷型突变株的筛选方法——4个环节 诱变剂处理、淘汰野生型、检出缺陷型、鉴定缺陷型 △诱变剂处理 △淘汰野生型：抗生素法（青霉素法、制霉菌素法）、菌丝过滤法 青霉素法：用基本培养基培养细菌，并在培养基中加入青霉素（抑制 细菌细胞壁的生物合成），由于青霉素只对能生长的野生型细菌起作用而 无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细菌。所以野生型细菌被淘汰，而 营养缺陷型细菌被保留下来，此法适用于细菌。 制霉菌素法：方法同青霉素法，制霉菌素能引起真菌细胞膜的损伤， 此法适用于真菌。 菌丝过滤法：把霉菌和放线菌的孢子放在基本培养基里培养，由于在 这种培养基里只有野生型的霉菌和放线菌的孢子才能萌发成菌丝，而营养 缺陷型的孢子不能萌发，或虽然萌发，但不能长成菌丝体，所以用滤孔较 大的擦镜纸过滤，就可去除大部分野生菌株而保留营养缺陷型细菌。 △检出缺陷型：夹层培养法、限量补充培养法、逐个检出法、影印平板法 夹层培养法： 在培养皿底层倒入一层基本培养基（第一层），待凝后，在其上倒入一层 稀释菌液与基本培养基的混合物（第二层），凝后再倒入一层基本培养基 （第三层），培养后长出的菌落为野生型，其上再加上一层完全培养基（第 四层），经过培养后新出现的菌落则多数是营养缺陷型。这种方法一般适用 于细菌。 野生型 缺陷型 限量补充培养法：经诱变处理的细胞接种在 含有微量蛋白 胨的基本培养基平板上，野生型菌株迅速长成较大的菌落，而 营养缺陷型生长缓慢，只形成微小菌落。 逐个检出法：把经诱变处理的菌液涂布在完全培养基的琼 脂平板上，经培养，长出单菌落后，用接种针把单个菌落逐个 整齐地分别接种到基本培养基平板和另一完全培养基平板上， 使两个平板上的菌落位置严格对应。经培养后，如果在完全培 养基平板的某一部位上长出菌落，而在基础培养基的相应位置 上却不长，说明此乃营养缺陷型突变株。 突变株 影印平板法：把经诱变处理的菌液涂布在完全培养基的琼脂平板上，经 培养，长出单菌落后，用影印法把此平板上长出的全部菌落转印到另一基本 培养基平板上，经培养后，比较前后两个平板上长出的菌落，如果发现在前 一培养基平板上的某一部位长有菌落，而在后一平板上的相应部位却呈空 白，说明此乃营养缺陷型突变株。 △鉴定缺陷型：生长谱法 生长谱法：营养缺陷型 的种类很多，选出后需要鉴 定。常用生长谱法，即在基 本培养基中加入某种物质时， 能生长的菌便是某种物质的 缺陷型。其步骤是，首先鉴 定需要哪一类生长因子，其 次鉴定具体因子。 第二节重点知识回顾 1、解释名词：基本培养基、完全培养基、补充培养基、营养缺陷型、 野生型、原养型、回复突变、诱变育种 2、基因突变：概念、类型（四个方面划分）、特点（七点） 3、证明基因突变自发性和不对应性的3个经典实验：实验者、实验要 点、实验证明。 4、诱变剂：概念、种类（在物理诱变剂中，尤以紫外线为最方便，而 化学诱变剂中以“超诱变剂”——NTG、NMU最显著） 5、Ames试验：原理、方法、应用、优点。 6、诱变、筛选是诱变育种的两个主要环节，诱变是随机的，筛选是定 向的。 7、琼脂块培养法（筛选产量突变株）、梯度平板法（筛选抗性突变 株）实验要点。 8、营养缺陷型突变株的筛选方法——4个环节（诱变剂处理、淘汰野 生型、检出缺陷型、鉴定缺陷型） 第七章 微生物的遗传变异和育种 第一节 遗传变异的物质基础 第二节 基因突变和诱变育种 第三节 基因重组和杂交育种 第四节 基因工程 第五节　菌种的衰退、复壮、保藏 基因重组：又叫遗传重组，简称重组，是指两个独立基因 组内的遗传基因，通过一定的途径转移到一起，形成新的稳定 基因组的过程。 基因重组实质上是核酸分子水平上的杂交，与细胞水平上 的杂交有明显的区别，但细胞水平上的杂交必然包含了分子水 平上的重组。 基因重组是杂交育种的理论基础，杂交育种比诱变育种更 具有方向性和自觉性（选用已知性状的供体菌和受体菌），是 一种重要的育种手段。