免疫微生物实验课件（汕头大学）病原性球菌.pptVIP

* * * * * * * 病原性球菌 病原性球菌 Pathogenic cocci 脑膜炎奈瑟菌N. meningitidis 淋病奈瑟菌N. gonorrhoeae 葡萄球菌属 链球菌属 奈瑟菌属 Staphylococcus Streptococcus Neisseria 金黄色葡萄球菌S. aureas 链球菌 肺炎链球菌S. pneumoniae 病原性球菌的形态染色与培养(革兰染色) 致病性葡萄球菌的分离和鉴定 甘露醇发酵（示教） 血浆凝固酶玻片法（操作，提供菌种） 血浆凝固酶试管法（示教） 抗“O”试验（结果示教） 粪便标本接种于SS培养基（每人一个，下次实验用） 操作内容 挑取本组分离的浓汁单菌落进行革兰染色 利用提供的菌株进行玻片血浆凝固酶的实验 示教内容 4张示教片（画图并描述细菌形态、排列、染色） 血平板溶血观察（菌落形态、大小、表面、边缘、透明度、色素、溶血性） 甘露醇发酵 血浆凝固酶试管法 抗“O”试验 1. 病原性球菌的形态染色与培养 示教片： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌 （形状、大小、排列、染色 ） 不完全溶血 (α型溶血) 完全溶血 (β型溶血) ---菌落观察(示教) 金葡、白葡、乙型溶血性链球菌 （形态、大小、表面、边缘、透明度、色素、溶血性） 2 致病性葡萄球菌的分离和鉴定 甘露醇发酵（示教） 0.5%琼脂粉＋牛肉汤＋甘露醇＋指示剂（溴甲酚紫） 血浆凝固酶试管法（示教） 检测哪种凝固酶？ 标记后，稀释兔血浆各1滴 无菌操作，取菌苔少许，混匀，观察有无凝集 S.a S.e 血浆凝固酶玻片法（操作，提供菌种） 结果观察： 出现颗粒状凝集：＋ 不凝集：－ 2 致病性葡萄球菌的分离和鉴定 色素 溶血素 甘露醇发酵 血浆凝固酶 耐热核酸酶 致病性葡萄球菌 金葡 金黄色 ＋ ＋ ＋ ＋ 非致病性葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 白色或柠檬色 － － － － 鉴定致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌得4大指标 生物学性状 致病性 免疫性 微生物学检查 防治 形态染色 培养 生化反应 抗原结构 抵抗力 致病物质 所致疾病 金葡 G+ 低 色素 溶血 4指标 SPA 强 耐药株 Coagulase staphylolysin PV Enterotoxin Exfoliatin TSST-1 超抗原 侵袭型疾病 食物中毒 假膜性肠炎 烫伤样皮肤综合征 毒性休克综合征 不强 直接涂片 分离培养 药敏 防止医源性感染等 乙链 G+ 荚膜 较高 溶血 菊糖- 胆汁溶菌- 弱 细胞壁成分 外毒素 （红疹毒素 链球菌溶血素） 侵袭性酶 化脓性感染 猩红热 风湿热、 急性肾小球肾炎 同型特异性免疫力 直接涂片 分离培养 血清学（ASO） 青霉素G 肺链 G+ 矛头状成双 荚膜 较高 草绿色溶血 自溶酶 胆汁溶菌＋ 弱 荚膜 大叶性肺炎 牢固 荚膜多糖疫苗 脑膜炎奈瑟菌 G- 肾形成双 高 巧克力培养基 弱 内毒素 流脑 体液免疫为主 疫苗 淋病奈瑟菌 G- 咖啡豆成双 高 弱 淋病 可自愈，免疫不持久 性传播疾病 病原性球菌 3 抗“O”试验 原理：中和试验 溶血素“O”＋抗溶血素“O” -----溶血作用被中和 1 2 3 4 5 0.5ml 0.5ml 0.5ml 弃去 1:200 1:400 1:800 溶血素 对照 标记 加NS 加血清 加溶血素 反应45min,37?C 加1%RBC 倍比稀释 在前4管中加 0.25ml 反应45min 1－4管：0.5ml 第5管：0.75ml 0.5ml 1:100血清 0.25ml 不加 血清 3 抗“O”试验 control 红细胞 对照 不加血清 和溶血素 结果观察： 完全不溶血的血清最高稀释度即为抗“O”抗体的效价。 正常参考值为 400单位以下。 意义： －活动性风湿热以及溶血性链球菌新近感染的 辅助诊断。 操作内容 挑取本组分离的浓汁单菌落进行革兰染色 利用提供的菌株进行玻片血浆凝固酶的实验 示教内容 4张示教片（画图并描述细菌形态、排列、染色） 血平板溶血观察（菌落形态、大小、表面、边缘、透明度、色素、溶血性） 甘露醇发