枯草芽孢杆菌生物素操纵元初步改造.PDFVIP

( ) 第 35 卷 　第 7 期 西北农林科技大学学报 自然科学版 Vol . 35 No . 7 2007 年 7 月 J ournal of Nort hwest A F U niver sit y (Nat . Sci . Ed . ) J ul . 2007 枯草芽孢杆菌生物素操纵元的初步改造 1 ,2 3 1 1 1 1 1 张西锋 ,李万芬 ,袁新宇 ,张炜炜 ,刘 　波 ,王 　俊 ,杨明明 ( 1 武汉阳光广济医药开发有限公司 ,湖北 武汉 43007 1 ; 2 西北农林科技大学 生命科学学院 , 陕西 杨凌 7 12 100 ;3 湖北工业大学 生物工程学院 ,湖北 武汉 430068) [摘 　要] 　为了克服生物素生物合成中的抑制作用 ,提高生物素操纵元基因本底水平的表达 ,分别构建了整合 表达载体 p GJ j 0 1 和 p GJ j 02 , 通过双交叉整合 的方式先后将线性化 的 p GJ j 0 1 和 p GJ j 02 整合到枯草芽孢杆菌 A S1094 的染色体上 ,构建了枯草芽孢杆菌 GJ Z0 1 ,用强启动子 P431 替换掉生物素操纵元 自身的启动子 Pbiotin ,并 在 bioB 和 bioI 基因间加入强终止子和强启动子 P432 。经 PCR 和 Sout hern 检测表明 ,整合构建正确 。试验可为下 一步研究生物素操纵元基因表达提供良好的宿主菌素材 。 [ 关键词] 　枯草芽孢杆菌 ;生物素 ; 同源重组 [ 中图分类号] 　Q786 [文献标识码] 　A [文章编号] 　167 19387 (2007) 070 16906 Preconstruct e d of Bacullus subtili s biotin op eron Z HAN G Xifeng1 ,2 ,L I Wanf en3 , YU AN Xinyu 1 ,Z HAN G Weiwei1 ,L IU Bo 1 , WAN G J un1 , YAN G Mingming1 ( 1 Comp any of Yang g uangGuangj i M e d ical R D Co. L t , Wuhan , H ubei 43007 1 , Chi na; 2 Col leg e of L if e S cience , N ort hw es t A F ) Uni vers ity , Yang l i ng , S haanx i 7 12 100 , Chi na; 3 Col leg e of B iotechnology , H ubei Uni vers ity of Technol ogy , Wuhan , H ubei 430068 , Chi na Abstract : In or der to overco me t he inhibition in biotin biosynt h