日本血吸虫未成熟卯单链抗体库的构建、筛选及初步应用.pdfVIP

Research hcraeseRsrepaP PI Biophys洒 ll黧善展and WWW．pibb．ae．cn 日本血吸虫未成熟卯单链抗体库的构建、 筛选及初步应用串 何卓-’ 汪世平加‘ 肖小芹·) 曾少华力 刘明社砷 李林1’ 周帅锋1) (1)中南大学湘雅医学院寄生虫学系，长沙410078：嘲南师范大学第三附属医院，长沙410006： 目山西省长治医学院寄生虫学教研室，长治046000) 摘要运用嗽菌体展示技术构建同本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(虻Fv)表达文库，以天然分子候选疫苗 SIEA26～28 PET32a，诱导SIEA26～28 28Jcu天然分子候选疫苗相关的编码基因．结果显示，所获得的SlEA26～28ku特异性scFv，表达量高，采用该探针初步筛 选出相关基凼核糖体蛋白s4．SIEA26～28ku特异性seFv的获得，为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选 疫苗SlEA26～28ku的编码基凶奠定，基础． 关键词 日本血吸虫，未成熟虫卵可溶性抗原(SmA)，单链抗体(scFv)，噬茼体展示抗体库，eDNA文库 学科分类号R383 血吸虫病是一种危害严重的人兽共患病．化疗 库，用ELISA筛选获得SIEA26～28ku特异性 与疫苗的联合应用，为长远有效控制日本血吸虫病 的传播带来了希望【l】．成熟卵是血吸虫病的主要致 28ku．scFv，诱导SIEA26--一28ku特异性scFv的大 病因素和传播血吸虫病的唯一因子．如采用免疫方 量表达．进一步以此为探针，对日本血吸虫尾蚴 法使雌虫产卵量降低或虫卵发育受阻，从而减少虫 eDNA文库进行了初步筛选．现将结果报告如下． 卵的排出，对控制血吸虫病传染源的传播具有重要 1材料和方法 意义．因此，抗生殖、抗卵疫苗的研究一直受到 WHO／TDR的重视【21． 1．1质粒，菌种，噬菌体和文库 近十多年来，我们课题组多年的研究已经证 实：SIEA具有抗虫卵胚胎发育和抗雌虫生殖产卵 的作用【，·4】，随后的研究发现，SⅢA26～28l(u抗原 分子是其中的主要效应成分之一【5咽，可诱导产生 较高滴度的体液免疫应答．免疫组化定位研究发 寄生虫学系保存；日本血吸虫尾蚴cDNA文库由 现，抗卵抗体不仅可以直接作用于虫卵胚胎，导致 南方医科大学陈晓光教授构建、惠赠． 胚胎期死卵的增加和组织中成熟卵的下降，而且还 1．2动物 与雌虫卵黄腺和紧邻卵黄腺的肠腔内膜组织有高度 6周龄雌性BALB／c小鼠购自武汉东湖区疾病 的亲和性(4，9】．因此，大量制备这种特异性抗体， 对于筛选、分析鉴定天然分子候选疫苗相应的编码 基因，为解决天然分子分离纯化与制备的难题，提 供一条可能的途径．近几年来，噬菌体单链抗体技 联合资助项目． 术的发展，为我们快速获得具有与完整抗体相同抗 ”通讯联系人． 原结合功能的单链抗体(scFv)提供了方便． 为此，我们通过构建SIEA噬菌体单链抗体收稿日期：2008-01-08，接受口期：2008-03-25 ·922- 生物化学与生物物理进展Pro昏Biochem．Biophys． 2008；35(8) 控帝0中心． 1．3主要试剂 变性3rain，94℃变性30s，65℃退火45s，72℃ SIEA、电泳纯SIEA26～28ku由中南大学湘雅 延伸45s，30个循环后72℃延伸7min