实验三 海洋动物目的基因的发育.pptVIP

一、目的要求 掌握RNA原位杂交的原理; 熟悉胚胎整体原位杂交操作技术； 加深对发育过程中基因表达时空特性的理解 实验三 海洋动物目的基因的发育表达图式 二、原位杂交技术原理 定义：是一种应用标记探针与胚胎或组织细胞中的待测 核酸杂交（碱基配对），再应用标记物相关的检测系 统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术 整体原位杂交（Whole-mount in situ hybridization）： 将目的基因的探针与胚胎整体进行杂交的方法 带有标记物的已知序列的核酸片段 地高辛（DIG）标记的UTP ALP标记的Anti-DIG抗体 ALP 碱性磷酸酶显色 DIG Anti-DIG抗体 ALP ALP底物 RNA原位杂交原理：主要是利用碱基互补原理，将体外合成的带有标记的单链反义RNA（RNA探针）与组织或细胞中待测的mRNA发生杂交，从而将探针定位在靶基因的表达区域内。再通过显色反应，显示其表达部位。 标记物的种类分为2种，即非放射性的标记物（地高辛(DIG)和生物素(BIO)）或带有放射性的同位素(32P)。 探针间接标记法 DIG标记 实验动物：栉孔扇贝胚胎和幼虫 目的基因：vasa基因 ——生殖细胞