重组人神经生长因子β基因腺病毒的构建与鉴定.pdfVIP

出耍匿型太堂堂塑：垫!兰生!!旦：箜箜鲞筮!!塑 ·1013· 重组人神经生长因子Ijl基因腺病毒的构建与鉴定 柏宏亮，白转丽，王瑞，何佑成(西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科，西安710061) 摘要： 方法 目的构建表达人神经生长因子B基因片段的重组腺病毒AdcMV—hNGF．B。以健康人白细胞中DNA为模 中的表达。 能在HeLa细胞中表达。 具有高滴度活性和良好的感染人类细胞、表达目的蛋白的能力。 关键词： 人神经生长因子(hNGF)；基因表达； 重组腺病毒 中图分类号：Q78文献标志码：A文章编号：1007—6611(2014)1l—1013一05 C蚰st阳c廿蚰粕diden倘∞廿∞ofther∞哪bin锄t adeno、，ir吣-lINGF-B BAI zhuanli，wANGRui，HE Hon斟i锄g，BAI Youcheng(DepⅡ疗，聊眦旷曰um 矿艇’on．，洳￡o昭‰i睨巧计，舡’nn7JDD6J，仍i胍) Abstr锄ct： constructtherecombinantadenovims with human DNAaLs 0电，ect娩To AdCMV—hNGF．B．Me琥。击healthy leukocyte a wasusedto of wereinsertedinto template，PCR arnplifyhNGF—Bcodingre百onfragments．ThegenefhgmentshNGF-B pGEM-T-Easy vectortofo瑚therecombinaIlt and adenovimsshuttle plasmidpGEM-T／hNGF-B．The replicated—defbctive pGEM一7I：／hNGF-B plasmid wereconstmctedinIoadenovillJsshutne thent}le pACCMV—pLpA plasmid pACCMV—hNGF-p．AndpACCMV．hNGF—B柚dauxiliary wereco·transfectedintothe293cells．r11IlerecombinaIltadenovims was PJMl7 constllJcted觚er packa西ngplasmid AdCMV—hNGF-B in of recombination293cells．The was the inHeLacellsirlfected gene identified，and homologous AdCMV—hNGF—B hNGF—Bexpression witIl wastested ＆s以招 The were clonedf而m AdCMV-hNGF·pbyimmunohistochemistry．hNGF—pgenefhgmentssuccessflJlly blood DNA．11