鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选.pdfVIP

畜牧兽医学报2013，44(8)：1330—1336 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica doi：10．1 1843／1．issn．0366—6964．2013．08．023 鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建 及筛选 戴国俊1’2，孙大辉1’2，林雨鑫1’2，孙明明1’2，王 翔1’2，王金玉1’弘， 张跟喜1’2，谢恺舟1’2，施会强3，侍苗苗1 (1．扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009；2．江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州225009； 3．江苏京海禽业集团有限公司，南通226103) 摘 要：本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体，对其进行滴度测定，并进行有效干扰靶 点的筛选，为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA，反转录，扩增zyxin基 因的编码区，并将其克隆到真核表达载体Pex-6上。设计针对zyxin的shRNA序列，应用基因重组技术插入到 将得到的病毒原液lo倍稀释6个梯度，分别转染293T细胞，进行滴度的测定。将构建好的4条慢病毒载体与 x108 定正确；共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1TU·mI。．。，适合感染目的细胞，经过筛选，C03对 zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳。成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体，并进行了有效干 扰靶点的筛选，为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础。 关键词：zyxin基因；RNAi；慢病毒干扰载体；真核表达载体；鸡 中图分类号：$813．3 文献标志码：A 文章编号：0366—6964(2013)08—1330—07 ConstructionandSelectionofChickenRecombinantLenti-virus Zyxin InterferenceVectors DAI Da-huil～，LIN Yu-xinl～，SUN Guo-junl～，SUN Ming-min91～，WANGXian91～， WANG Gen-xil”，XIEKai—zhoul～，SHI Miao-mia01 Jin-yul，孙，ZHANG Hui—qian93，SHI AnimalScienceand 225009，China； (1．Collegeof TechnologyYangzhou University，Yangzhou Lab Animal and andMolecular 2．Key for Reproduction J Genetic，Breeding Designofiangsu Co．，Ltd， Province，Yangzhou225009，China；3．JiangsuJinghaiPoultryIndustryGroup 226103，China) Nantong aimOtthis wasto 4 Lenti—virus