鸭源 PKCI miRNA 表达载体的构建及鉴定.pdfVIP

贵州农业科学 ， （）： 　 　 ２０１４ ４２ ４ １４８ ～１５１ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａ ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 　 ｇ 畜牧 ·兽医 ·水产 ·蚕 ［文章编号］ （ ） １００１３６０１ ２０１４ ０４０２２１０１４８０４ · · · Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｆｉｓｈｅｒｙ Ｓｉｌｋｗｏｒｍ 鸭源ＰＫＣＩ ｍｉＲＮＡ 表达载体的构建及鉴定 ， ， ， ， 熊朝丽１ ，赵 碧１ ，周碧君１ ２ ，王开功１ ２ ，程振涛１ ２ ，文 明１ ２  （ 贵州大学动物科学学院，贵阳贵州 ； 贵州省动物疫病研究室，贵阳贵州 ） １． ５５００２５ ２． ５５００２５ ［摘 要］为给蛋白激酶 抑制蛋白（ ）在鸭肠炎病毒增殖的作用机制奠定基础，根据 基因 Ｃ ＰＫＣＩ ＰＫＣＩ 　　 　 序列 设计原则，合成 对 寡聚单链 ，退火成双链 ，用载体构建试剂 ｍＲＮＡ ｍｉＲＮＡ ４ ｍｉＲＮＡ ＤＮＡ ｄｓＤＮＡ 盒进行重组质粒构建，插入 ｍｉＲＮＡ 表达载体（ｃＤＮＡＴＭ ６．２ＧＷ／ＥｍＧＦＰｍｉＲ）构建表达质粒，转化至感受 ｐ 态细胞ＤＨ５ ，筛选并提取重组质粒进行测序分析。结果表明：在含壮观霉素的 ＬＢ 平板可生长出含目的基 α 因的重组细菌菌落；测序表明成功构建了鸭源 ＰＫＣＩ 基因 ｍｉＲＮＡ 表达载体，重组质粒 ｐＳｉｌｅｎｃｅｒＰＫＣＩ１ ～ ＳｉｌｅｎｃｅｒＰＫＣＩ４ 的插入部分大小为７１ １３４ ｂ 、 、 和 ；重组质粒 ｐ ～ ｐ ６８ ～１３１ｂｐ ６８ ～ １３０ ｂｐ ６８ ～ １３１ ｂｐ ｍｉＲＮＡ 有鼠类 骨架结构，即左侧为天然 结构，右边为发卡结构的末端环区（ ）和配对 ｍｉＲ１５５ ｍｉＲ１５５ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｌｏｏｐ 区域内部的末端环区ｍｉＲＮＡ 结构。 ［关键词］蛋白激酶 抑制蛋白；鸭肠炎病毒核衣壳蛋白；靶向小分子干扰 ；载体构建 Ｃ ＲＮＡ ［中图分类号］ ［文献标识码］ Ｑ７８４ Ａ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ