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鼠白细胞介素-33真核质粒的构建及其在GL261中的稳定表达.pdf
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·实验研究·
鼠白细胞介素一33真核质粒的构建及其在
GL261中的稳定表达
孙云赵洪洋王旋 熊志勇 卢高方姜晓兵
【摘要】 目的构建鼠白细胞介素-33(IL-33)真核表达质粒，建立并检测稳定表达IL一33的细
胞株GL261。方法从Genebank找出鼠IL-33基因全长序列(801bp)，人工合成、装载于表达载体
pEZ—M03，扩增后酶切鉴定。将鉴定正确的质粒转染的小鼠胶质瘤细胞GL261，并用浓度为200mg／L
的G418筛选出阳性克隆，采用实时定量聚合酶链反应(Real—timePCR)检测目的基因表达量；
Western
blot法检测目的蛋白的表达量，并观察转染后的GL261细胞体外生长状况。结果成功构
建鼠IL-33真核质粒pEZ-M03一raiL33，经过浓度为20mg／L的G418工作液筛选出了稳定高表达鼠
IL一33的细胞株GL261，且其生长状态未受到转染基因的影响(P0．05)。Real—timePCR检测目的
基因在瞬转、稳转细胞株中皆为高表达(P0．叭)。Western
blot检测到稳转细胞株中目的蛋白明
显高表达(P0．01)。结论本研究构建的鼠IL一33真核质粒能于GL261中获得稳定高表达。
【关键词】 白细胞介素．33；构建；表达
Constructionofmouseinterleukin-33 anditsstable inGL261cells
eukaryoticplasmid expression
SUN
Yun，zHAo
Hong—yo唱，WANGXuan，XIONGzht-yo鸭，LUGao如ng，JIANGXiao—bing．Depart—
merit and
Medical ScienceTechnol—
of College，HuazhongUniversityof
Neurosurgery，UnionHospital，Tongii
430022．吼ina
ogy．Wuhan
author：JIANG
Corresponding Xiao—bing．Emait：jxb917@126．COITt
Toconstructthe ofmouse
【Abstract】0bjectiveeukaryoticplasmid interleukin-33(IL一33)，and
establishGL261cell ThefuU
line IL一33，Methods mouseIL-33
stablyexpressing sequence(801bp)of
wasfoundfrom andloadedinthe vector
Genebank．then
synthesizedartificially expressionpEZ—M03，The
recombinantwiththe wasidentified GL261cellsweretransfectedwith
plasmid targetgene bydigestion．The
of
and cloneswerescreenedinthe G418(200
pEZ—M03．mIL33positive
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