miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移及SIRT1表达的调控.pdfVIP

· 446· 检验医学2014年5月第29卷第5期 LaboratoryMedicine，May2014，Vol29．No5 文章编号：1673-8640(2014)05-0446-06 中图分类号：Q74 文献标志码：A DOI：10．3969／j．issn．1673—8640．2014．05．005 miRNA一221和 miRNA一222对前列腺癌细胞 PC一3的增殖、迁移及 SIRT1表达的调控 杨 晓，甘 蓉，杨英梅，赵苓旭， 薄金双， 官雁呜， 孟庆贺， 吕建新 (温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室，浙江 温州 325035) 摘要：目的 观察前列腺癌 PC-3细胞中微小 RNA(microRNA，miRNA)-221和miRNA-222对细胞增殖和迁 移的作用，以及对沉默信息调节因子 1(SIRT1)表达的影响。方法 设立无处理细胞组(简称control组)、转染空 载质粒pEX-5组 (简称pEX-5组)、转染miRNA-221反义抑制质粒组 (简称miRNA-221抑制组)、转染miRNA一222 反义抑制质粒组 (简称 miRNA-222抑制组)，应用细胞计数试剂盒 (CCK一8法)检测miRNA一221和miRNA-222对 前列腺癌细胞增殖的影响；采用细胞划痕修复实验检测miRNA-221和miRNA-222对细胞迁移能力的影响；采用 免疫印迹法和荧光定量聚合酶链反应 (PCR)检测 SIRT1在蛋 白水平和mRNA水平的变化；采用 miRNAanda靶 标进行预测分析。结果 在成功抑制了PC一3细胞中miRNA一221或 miRNA-222的表达后，连续7d检测细胞活 性 ，miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的细胞活性 ( 值)较pEX-5组降低 1．5—2．0倍，自第 3天起两 组之间即有明显差异 (t=6．7，P0．叭；t=5．3，P0．01)；划痕实验显示，miRNA-221抑制组和miRNA一222抑 制组的迁移能力明显低于pEX-5组。miRNA-221抑制组、miRNA一222抑制组中SIRT1蛋白的相对表达量分别为 (0．26±0．021)、(0．21±0．0058)，与pEX一5组 (0．14±0．017)比较差异均有统计学意义(￡值分别为6．3、6．4，P 均0．05)；而SIRT1mRNA的表达水平 3组之间差异无统计学意义(P0．05)。结论 miRNA-221和miRNA一 222能促进前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移能力，影响SIRT1蛋白的表达 。 关键词 ：微小RNA一221；微小 RNA-222；沉默信息调节因子；前列腺癌 M odulation of the proliferation，migration and SIRT1 expression of prostate cancer ceH PC-3 by miRNA-221andmiRNA-222 YANGXiao，GAN Rong，YANG Yingmei，ZHAO Lingxu，BO Jinshuang，GUAN Yanming，MENGQinghe，LUJianxin． (ZhejiangProvincialKeyLaboratoryofMedicalGenetics，SchoolofLaboratory Medicine andLifeScience，WenzhouMedcialUniversity，ZhejiangWe~hou325035，China) Abstract：Objective ToinvestigatetherolesofmicroRNA(miRNA)-221andmiRNA一222ontheproliferationand migrationofprostatecancercellPC-3nadtheinfluenceonsilentinformationregulator1(SIRT1)．Methods Thegroups werearrnagedascellswithouttreatment(controlgroup)，cellstransfeetedwi