葡萄病毒病的双链RNAdsRNA检测技术研讨.pdfVIP

葡萄病毒病的双链RNA(dsRNA)检测技术研究* 李东株 牛建新 (石河子尢学农学院园林系，石河ff832003) 摘要作者将病毒dsRNA分析检稠¨置柱应用载果树嫡毒的诊断检测上，并时生产中广泛发生的 葡萄卷叶病毒(GLRV)，葡萄扇叶病毒(GFV)L,撕Y检测并确立检测标准。为夸后葡萄病毒痛的诊 断检测莫定了良好的基础．同时，本实验还对在葡萄上发生的一种黄边花叶进行了研究，并获得 了这种病毒的dsRNA，证实其为病毒侵染所致． 关键词葡萄：病毒诊断；dsRNA提取和检测 当前果树无毒化栽培的经济效益和手t会效益越来越明显，成为果树生产发展的必然趋 势。在推广果树无病毒苗过程中．病毒的检测州是关键环节之一，因此，建立快速有效的 病毒检测方法是非常重要的。域链RNA分析法具有快速、稳定．准确、简便等优点【1,21，适 州于不同层次的科研单位。可以成为今后果树病毒诊断检洲的～种手段。作者应抖{此方法 对葡萄病毒病进行了研究，井取得良好的效果。 1 材料和方法 11供试材料 1-1．1供试毒原选择fi河子入学试验站和f“可子农业开发中心葡萄资源圃中症状明显的 葡萄痫株。主要品种有：黼丽珠(ti河子丈学试验站，明显卷叶症状)、加浓玫瑰(石河子农 业开发中心葡萄资源圃．扇叶症状)、斯选拉斯(石河子农业开发中心葡萄资源圃，扇叶症状)、 里扎马特1号(石河子大学校吲内．黄边花n{‘症状)。 1．1．2 无病毒试材 选择轩河子大学试验站内保存的葡萄无病毒苗作为供试材料： LN．33(91进的葡萄指示植物，无毒苗)、无核自2号(石河子大学吲林系果树教研室培育的脱 毒苗)、葡萄实生苗{97年播种培育的实生苗)。 1．1．3测试样品里扎马特2号(取白l订可子人学试验站，无明显症状)、无核白1号(取自石河 子大学试验站，无明显症状)、办霞珠(从日本引入的无病毒酿酒品种)、梅鹿辄(从日本引入 的无病毒酿酒品种)。 1．1．4木本指示植物主要指示植物葡萄品种有LN．33、品丽球、圣·乔治等，由自if}区 动植物检疫局从日本引入．现保存在订河子人学试验站。 Promega公司；扇叶病毒(GFV)抗缸清由新疆动植物检瘦局张徉林先生提供：其他化学试剂 均为国产或进口优级纯或分析纯试剂。 1．2试验方法 1．2．1症状类型调查1996～1997年在行河子葡萄种植地进行调查，对有症状的葡萄进行挂 牌标记。定期进行调查描述。 1．2．2指示植物嫁接试验97年5月底将待检病株的接穗嫁接_T健康指示植物上，成活后定 ‘ 农业部。九五”资助醒题 期观察，98年春继续进行观察鉴定。嫁接无毒苗接穗和未嫁接的指示植物为对照， 1．2．3血清学试验取植株上部新生枝条的幼嫩叶片，以常规琼脂双扩散法进行。 丙烯酰胺凝胶电泳之后进行银染并分析谱带。 2 结果与分析 2．1田间症状观察 对病株进行定期观察，发病过程如一F 卷叶病株(品丽珠)：6月中旬叶片开始出现淡红色斑点和反卷现象，随后红色斑点渐渐 扩大愈合，到秋季落叶前整个叶片变红．但叶脉仍为绿色。表现出典型的卷叶病症状。 扇叶病株(加浓玫瑰)：5月上中旬部分叶片表现扇叶畸形，叶缘锯齿增多．缺刻变深， 叶脉聚集。表现出明显的扇叶症状。 叶病株(斯达拉斯)：5月上中旬部分叶片表现扇叶畸形，叶缘锯齿增多，缺刻变深，叶 咏聚集。表现出明显的扇叶症状。 黄边花叶病株(里扎马特l号)：6月中旬叶缘开始出现黄边，并在叶片上形成数量大小不 等黄色斑块，以后斑块数渐渐增多，黄边花叶症状一直可持续到落叶前。 2．2木本指示植物嫁接试验结果 通过系统观察，发现不同的接穗嫁接在指示植物上的症状反应不同，详见表l。 表1木本指示植物-gAA-后的反应症状 !!!! 供试材料症状 接穗品种 指求}卣物 症状反应 翌璺墨!竺!!!竺!型!兰!!竺：竺!!垒： !!尘!!!!里! !理￡塑竺垡里苎型!里—— 卷叶红叶 品丽珠 品丽珠，LN-33，圣·乔治红也卷叶，叶反卷，无明显症状 扁叶 加浓攻瑰 品丽珠，LN．33，圣·乔治无明显症状，无刚娃症状，扇叶线纹斑