肾上皮细胞损伤后分子结构的变化及其诱导草酸钙结石形成的机理研究.pdfVIP

第44卷专辑 西北师范大学学报(自然科学版) 519 肾上皮细胞损伤后分子结构的变化及其诱导 草酸钙结石形成的机理 杨如娥，欧阳健明。 暨南大学 生物矿化与结石病防治研究所，广州(510632) 关键词：肾上皮细胞损伤；活性氧蔟；乳酸脱氢酶 从化学的观点看，肾结石的形成至少与三个因素密切相关：(1)尿液中尿石盐的过饱 和； (2)抑制剂浓度或活性降低，促进剂浓度增加；(3)肾上皮细胞膜表面的损伤，使 晶体滞留在肾脏中。 过饱和是肾脏中晶体形成的动力；而只有当肾脏损伤和肾功能异常等肾脏病理的改变 才能使晶体粘附并在肾脏中停留。草酸作用于细胞是肾结石形成的一个最重要的因素。草 酸能对肾上皮细胞产生毒性，包括改变膜的表面性能、细胞脂质、基因表达等，破坏线粒 体功能，形成活化氧簇(RoS)。在肾脏中，草酸钙晶体能堵塞肾小管，扰乱细胞功能， 并杀死邻近细胞KJ。 细胞和动物活体实验均表明，近端肾小管细胞在草酸或草酸钙晶体作用下会诱导细胞 膜的损伤13J。细胞膜损伤能诱导活性氧簇产生…、导致乳酸脱氢酶过度释放【2J和脂质过氧化 pl、细胞凋亡【41和晶体粘附等。活性氧簇的产生有研究表明可以通过自由基清除剂如抗氧 化酶、抗氧化剂(硒和维生素E等)来清除过度产生的自由基，抑制活性氧簇对上皮细胞 的氧化作用。有研究表明，尿粘蛋白(2】、Quercus翰licinaBI啪e提取物[4b】等对乳酸脱氢 酶的过度释放有抑制作用。脂质过氧化通常是通过测定丙二醛的含量来反映脂质的过氧化 程度。而细胞凋亡可以通过半胱天冬酶．9、Bax．2基因家族等的蛋白质表达和半胱天冬酶．3 的活性变化来衡量的。 1活性氧蔟的产生 自由基、带有未配对电子的原子或分子，以及他们的代谢物统称为活性氧簇(reactive oXygenspecies，RoS)。肾小球内活性氧簇是生物体内有氧代谢过程中产生的活性产物，主 要包括超氧自由基、过氧化氢，氢氧自由基，单线态氧，过氧化脂类等。活性氧蔟的标准氧化 还原电位高，氧化能量强，具有一定毒性【2l。 肾上皮细胞在草酸、草酸钙晶体或者高草酸尿作用下，能导致活性氧簇的产生，但是 如果草酸或草酸钙晶体浓度过高就会导致活性氧蔟的量超过了内生抗氧化剂的抵御能力， 于是引起了肾脏的氧化应激并最终导致肾脏的损伤。活性氧簇还能引起细胞凋亡或坏死， 细胞增殖，产生结晶化调节剂和化学趋化作用¨l。 2乳酸脱氢酶(LDH)释放量显著增加 乳酸脱氢酶(LDH)是细胞内标志性酶，其化学和生物性质十分稳定。通常情况下乳酸 ‘基金项目：国家自然科学基金30672103)、教育部留学回国人员科研启动基金(教外司 )．联系人：Tcl：020E·mail：!Q埘盟囝叫：￡地：鳃 520 全国第f一四届人环化学暨第六届超分子化学学术研讨会论文专辑 脱氢酶的漏出很少，它的释放与细胞膜的完整性相关，且释放量与细胞受损程度呈正相关。 因此，测定乳酸脱氢酶的释放量可以反映出细胞的受损伤程度。草酸能显著增加乳酸脱氢 酶的释放量，这说明了草酸能诱导细胞损伤。 Hsieh N掣2】发现草酸作用于MDCK细胞2h能引起乳酸脱氢酶释放量的显著增加，在4h 时乳酸脱氢酶释放量继续增加。当用一水草酸钙晶体(COM)处理2h和4h时，乳酸脱氢酶 释放量显著增加。 加入一系列浓度的尿粘蛋白(Tamm．HorSfaIlProtein，THP)后发现，THP只有在高浓 度时才能减少草酸诱导自由基的产物。而当THP用唾液酸酶去糖基后，不管是在高浓度还 是低浓度下，用草酸处理2h还是4h都不会减少乳酸脱氢酶的释放量。加入COM后结果也是 一样的。这也说明了MDCK细胞中糖基化是抑制草酸诱导超氧化基产生的重要过程并起着 重要作用“J。 3丙二醛(MDA)量增加 映脂质过氧化的程度，也间接地反映出细胞受损的程度。脂质过氧化作用不仅把活性氧转 化成活性物质(即非自由基性的脂类分解产物)，而且通过链式和链式支链反应，放大活性 氧的作用[3b】。 Hsieh N等发现MDCK细胞在草酸作用下，能导致MDA含量的显著增加，加入CoM 在500nM时才有显著的抑制作用f2】。这也表明了草酸对细胞有损伤作用，而THP则能