食品生物技术导论 酶工程PPT.ppt

第四章 酶工程;教学目标;第一节 酶工程发展概况;不自觉的应用：传统的酿酒、制酱、制曲等。 初步认识酶的存在及作用： 1833年，佩恩和帕索兹发现能水解淀粉的酒精沉淀物（淀粉酶）并提出其热不稳定性； 1896年，巴斯德发现酒精发酵是由酵母引起的； 1897年，巴纳兄弟用酵母抽提液生产出了酒精；;第二节 酶的制备与发酵生产;（一）从生物细胞获取;（二）微生物发酵产酶;2. 发酵方法;① 间歇发酵法： 特点：先在适于菌体生长条件下培养，然后再转入产酶条件下进行发酵。产酶量高，同时营养物质与诱导物浪费少。 ② 连续发酵法： 特点：先将菌体培养至某一生长期如对数期，然后一边连续加入新鲜培养液，另外又不断地以相同速度放出培养产物，二者的速度应和生长速度一致，使菌体生长处于恒态条件，同时还可能打破酶合成的反馈阻遏，使产酶率提高。;3. 微生物发酵产酶工艺条件及控制;选育优良细胞（基因重组技术） 强化生产过程： 控制合理发酵条件：pH、温度、基质浓度等 添加诱导物：如乳糖诱导β-半乳糖苷酶 控制阻遏物浓度：产物积累一定浓度，合成受阻 添加表面活性剂：主要是非离子型表面活性剂 添加产酶促进剂： 植酸钙镁、聚乙烯等;（三） 酶的分离纯化 ;机械破碎;提取方法 ;第三节 酶的分子修饰;（一）酶分子的化学修饰;1. 大分子结合修饰;2. 肽链有限水解修饰;3. 侧链基团修饰：如将α-胰凝乳蛋白酶的氨基修饰成亲水性更强的-COOH等，酶活提高1000倍，且更耐热 4. 分子内或分子间交联：使用双功能试剂交联，更稳定 5. 氨基酸置换修饰：改变活力中心的氨基酸 6. 金属离子置换修饰：如将酰基化氨基酸水解酶的活力中心的Zn2+置换为Co2+。;（二）酶分子的物理修饰;第四节 酶的非水相催化（自学）;一、酶催化反应的介质;二、 有机介质反应体系 ;2. 反应体系中有机溶剂对酶催化反应的影响;三、 酶在有机介质中的催化特性;有机介质酶催化反应的优点;四、有机介质中酶催化反应及控制;五、酶非水相催化的应用;第五节 酶的固定化;酶的固定化：是指将酶与不溶性载体结合，使游离酶、细胞或细胞器等的催化活动完全或基本上限制在一定空间内的过程。 固定化后的酶其仍具有酶的催化活性，能连续进行反应，并且反应后的酶可以回收重复使用。;固定化酶的优点;固定化酶的缺点;（一） 酶的固定化原则 必须维持酶的催化活性和专一性 固定化的载体必须有一定的机械强度 固定化酶应有最小的空间位阻 固定化酶的载体应具有最大的稳定性;b. 包埋法 ;1. 吸附法;无机载体：活性炭、多孔玻璃、多孔陶瓷、 氧化铝、硅胶等； 如：用多孔硅为载体吸附米曲霉和枯草杆菌的淀粉酶以及黑曲霉的糖化酶，在45℃进行固定化。 代表性酶：α-淀粉酶、糖化酶、葡萄糖氧化酶 特点：吸附容量较低(一般小于1mg蛋白/g吸附剂)；酶活力损失少；与载体结合力较弱，容易脱落。;（2）离子吸附;DEAE-Sephadex固定化氨基酰化酶：将DEAE-SephadexA25充分溶胀．用0.5mol/LNa0H和水洗涤后，加入pH7.0~7.5的米曲霉3042粗酶液，充分混合(1g湿重载体加60ml酶液)后，于低温下搅拌过夜后，吸去上清液，再用蒸馏水和0.15mol/L醋酸钠水溶液洗涤固定化酶，置4℃备用。 此外，DEAE-纤维素吸附的α-淀粉酶、蔗糖酶已作为商品固定化酶。 ; 优点： 操作简单，处理条件温和，可以得到较多高活性的固定化酶；可充分选择不同电荷、不同形状的载体，吸附过程可以同时纯化酶，固定化酶在使用过程失活后可重新活化，同时载体可以回收再利用。 缺点： 吸附法制备的固定化酶易脱落，影响产物纯度和操作的稳定性。 ;2. 包埋法;（2）半透膜包埋法; 优点: 包埋法操作简单，由于酶分子只被包埋，未受到化学反应，可以制得较高活力的固定化酶．对大多数酶、粗酶制剂甚至完整的微生物细胞都是适用的。 缺点: 只有小分子底物和产物可以通过凝胶网络，而对大分子底物不适宜。同时，凝胶网络对物质扩散的阻力导致固定化酶动力学行为的变化、活力降低。 ;3. 共价键结合法;与载体共价结合的酶功能基团：氨基、羧基、酚基、巯基、羟基、咪唑基、吲哚基等 最常见的：氨基、羧基、酪氨酸和组氨酸的芳环。 常用的载体： 天然有机载体：纤维素、琼脂糖 合成高聚物：尼龙、多聚氨基酸 无机载体：多孔玻璃、金属氧化物 结合方法：重氮化法、烷基化法、芳基化法、溴化氰法、巯基-二硫键交换法等。;4. 交联法;常用交联剂：戊二醛、双重氮联苯胺-2,2-二磺酸等 交联方法： 酶直接交联法： 酶辅助蛋白交联法： 吸附交联法： 载体交联法：;（1） 直接交联法：一定条件下，加入一定量戊二醛溶液于酶溶液中，生成不溶性固定化