猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白编码基因重叠区的分离(1)研究.pdfVIP

猪的传染病 尤其是各种RNA病毒反向遗传系统的建立和发展。使{写许多RNA病毒的分子生物学取得 了长足的进展。利用这项技术，不仅能达到对病毒基因组调控机制．病毒的致病机理等进行 研究的目的，甚至还可以得到减毒毒株．开发新型的疫苗。 本研究从正在发病的猪场中提取的样品中分离到一株新的PRRSV，继而利用相关技术 成功构建出全长感染性克隆，这对以后的反向遗传操作和PRRsV的基因组复制，亚基因组 转录，结构蛋白翻译等方面的研究提供了新的研究平台。可为更有效的研制针对无名高热病 源的疫苗等提供理论基础． 参考文献略 猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白编码基因重叠区的分离 奈丹丹，孙志．王金勇，袁世山 (中固农业科擘院上海兽医研究所仲圜动物卫生与流行病学中心上海分中·心动物传染病研究室农业部 动物寄生虫病重点实验室，上海200232) 和0RF7，3tuIR)重叠区域拉开井插入酶切位点等反向遗传操作．构建了一系列突变的奎长质粒，随后进 行了病毒拯救和复制分析．结果表明：1)各突变奎长质粒均能够进行病毒拯救。井产生明显细胞嫡变；2) ORF间重叠碱基的 突变病毒具遣传稳定性：3)病毒空斑形态及生长曲线与索奉毒株近似．表明PRltsV 安排方式对酗毒的感染性是非必需的，获得的诸多突变病毒为进一步研制P腿sV基因标识疫苗，研究 PRRsv各编码蛋白功能奠定了基础． respiralorys”dmme·PRRS)自20世纪 猪繁殖与呼吸综合征(Porci∞r印roducnve柚d 80年代末首次发现至今已近20年llJ，虽然人们采取诸多方法防治PI汛s，但该病依然是当 前危害世界养猪业最严重的传染病之一．PRRsv与乳酸脱氢酶升高症病毒(LDV)、马动脉 (』r把帕，f，^出P)的成员口洲。套式病毒目还包括冠状病毒科(Ca，DM眦e)，与动脉炎病 毒科成员都具有相似的基因组组成和复制方式川。PRRsv基因组为不分节段的单股正义 IrNA．有5端帽状结构和3Ipoly(A)尾；基因组两端含有对病毒复制过程起调控作用的非 编码区(uInranslaIed RNA 码RNA依赖性RNA聚合酶(RNAdep朗dentpolymer∞e，RdRp)等病毒复制转录用 非结构蛋白(Non．s咖ct啪l 蛋白构成外观圆形有囊膜的病毒颗粒。已有实验证明，ORF5、6、7所编码的产物oP5、膜 基质蛋白M、核表壳蛋白N为病毒颗粒装配所必需的结构蛋白，而其他糖蛋白GP2、GP3、 GP4(分别由0RF2、3、4编码)等在病毒颗粒组装以及激发机体免疫过程中的作用还存在 争议川。 除0RFl与2以及oI强4与5外，PRRsv结构蛋白编码框架之间有少则几个多则逾百的碱 基重叠，这为进一步解析单个结构蛋白基因的功能带来了困难。Verheqe等人在研究嵌合马 动脉炎病毒时发现，由于oRF重叠区的影响，导致嵌合病毒失去感染性”l。因此。研究PRRsV OI球重叠区具有重要的意义。在已构建的PRRsv感染性克隆(pcBc2)的基础上，通过反 向遗传操作(R删er∞genetics I位点)， 与ORF7之间的重叠序列拉开，并在其中插入限制性酶切位点(尸∞I、Sw口I、一sc DNA克隆经体外转录戍RNA转染细胞后获得了一系列的突变病毒， 作者简介：余丹丹(198睁一)，女．云南楚雄人．实习研究员，主要从事分子病毒学方面研究 通讯作者：袁世山．Tel：02l·5÷084162-E-眦il：蛳shan冲ar@honTla队。巾 246 中国畜牧鲁医学舍动物传疑瘸学分耋第十二次学术研讨台 l材料与方法 1．1细胞与培养 ca衅16000) Marc．145由本实验室提供．细胞生长液为含6％胎牛血清(FBS·GIBcO 的DMEM(GIBcOCa饼12430)．维持液为吉2％FBS的DM