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植物生理生化实验指导
《植物生理生化》实验指导 (适用专业:农学类相关专业)
黑龙江八一农垦大学植物科技学院生理生化教研室 目 录
生物化学实验部分:
实验一、氨基酸的纸层析 …………………………………………………………… 1
实验二、蛋白质含量测定(设计性实验)…………………………………………… 5
实验三、酶的基本性质…………………………………………………………… 7
实验四、维生素C含量的测定……………………………………………………… 12
实验五、还原糖和总糖的测定……………………………………………………… 14
实验六、淀粉酶活性的测定………………………………………………………… 17
实验七、脂肪浸提——索氏脂肪浸提法…………………………………………… 20
实验八、一种简单实用的提取植物DNA的方法…………………………………… 22
实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定大麦、小麦种子纯度 ………………………… 24
实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定(综合性实验)………………………… 26
植物生理学实验部分:
实验一、植物组织水势的测定(小液流法)…………………………………… 28
实验二、植物伤流量的测定………………………………………………………… 30
实验三、根系活力的测定…………………………………………………………… 31
实验四、蒸腾强度的测定…………………………………………………………… 35
实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定(综合性实验)…………… 37
实验六、光合强度的测定(改良半叶法)…………………………………………… 39
实验七、呼吸强度的测定………………………………………………………… 41
实验八、植物抗逆性的鉴定(电导仪法)………………………………………… 43
实验九、植物缺水程度的测定(脯氨酸法)……………………………………… 45
生物化学实验部分
实验一 氨基酸的纸层析
一、目的:
层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析。其优点是能够分离与分析在组成、结构及性质上极为相似的物质;设备简单,操作容易,样品用量很少,结果也较明确。
本实验的目的在于要求学生掌握纸层析法的一般原理和操作技术。
二、原理:
纸层析法是以滤纸作为支持物的分配层析法。分配层析法是利用物质在两种不同混合溶剂中的分配系数不同,而达到分离的目的。通常用α表示分配系数。在一定条件下,一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数。
层析溶剂是选用有机溶剂和水组成的。由于滤纸纤维素对水有较强的亲和力(纸上有很多-OH 基与水以氢键相连),吸附很多水分子,一般达滤纸重的22%左右(其中约有6%的水与纤维素结合成复合物),因此使这一部分水扩散作用降低形成静止相;而有机溶剂与滤纸的亲和力很弱,可以在滤纸的毛细管中自由流动,便形成流动相。层析时,将滤纸一端浸入层析溶剂中,有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处,使其中的溶质依据本身的分配系数在两相间进行分配。分配的过程:一部分溶质随有机相移动离开原点而进入无溶质区,并进行重新分配,即一部分溶质从有机相又进入水相。随着有机相不断向前移动,溶质不断地在两相间进行可逆的分配,不断向前移动。各种物质因其分配系数的不同,在两相间分配的数量也就不同,分配系数小的溶质在流动相中分配的数量多,向前移动的速度快;而分配系数大的溶质在静止相中分配的数量多,移动的速度慢。所以各种溶质在层析的过程中由于移动的速度不同便可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率表示Rf 表示:
各种化合物在恒定条件下,经层析后都有其一定的Rf值,也就是说在层析谱中有一定的位置。借此可以达到分离、定性、鉴别的目的。
Rf值决定于很多的因素,其中最主要的是所分离物质的分配系数。物质的分配系数是由以下因素决定的:
(1)物质极性的大小。水的极性很强,一般极性强的物质就容易进入水相,非极性的物质易进入有机溶剂中。例如侧链含-OH和-NH2、-COOH较多的氨基酸分配在水相中,Rf值较小,而含非极性(如-CH3 )较多的物质其分子的极性降低,Rf值增大。
(2)滤纸的质地以及为水分饱和的程度。滤纸的质地必须均一、纯净、厚薄适当,具有一定的机械强度,层析前应为水和有机溶剂的蒸汽所饱和。
(3)溶剂的纯度、pH值和含水量。pH值和含水量的改变可使氨基酸和层析溶剂极性改变,Rf值也随之改变。
(4)层析的温度和时间。温度改变使溶剂中有机相含水量改变,Rf值也改变。当所有条件相同时,层析时间短,测Rf值的因素必须严格控制。
三、实验材料、仪器和试剂:
1、 实验材料:在25℃温箱中萌发2-3天的绿豆芽。
2、 仪器:(1) 恒温水浴一台;(2)烘箱一个;(3)研钵一个;(
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