郜刚分子生物学-05-DNA半不连续复制与修复.ppt

复习：DNA复制的大致过程： 1： 双链解开 8、DNA复制的过程： 3、延伸 8、DNA复制的过程： 4、 终止 复制的终止比较简单，当复制叉遇到DNA序列上重复出现的终止序列时， 复制的终止的实现 a、终止序列 E.coli 有两个终止区域， 分别结合专一性的终止蛋白 序列一：terE terD terA 序列二：terF terB terC 每个区域只对一个方向的复制叉起作用 b、专一性终止蛋白 E.coli 中由 tus gene 编码 通过抑制DNA螺旋酶而发挥终止作用 一个问题？ 在复制叉上DNA聚合酶分子要负责两条模板链的复制，虽然新生链的生长方向只能是5’-----3’，但是两条模板链的方向又是相反的，所以新生链的合成方向也是相反的。如果酶分子沿着一条模板链向前进，那么另一条模板链上的复制就无法进行，但是体内观察发现两条链上的复制几乎是同时进行的，这个问题是怎么解决的？ 推测： 两个酶分子？ NO！ 复制叉上根本容纳不了两个酶分子 两个活性中心？ YES Why? 冈崎的发现 OKAZAKI 3H标记复制中的DNA DNA复制过程中总是存在一条长的新生链 还存在一些短的小片段DNA单链，而且这些小片段DNA单链在DNA连接酶的作用下能够转化为成熟的DNA链 小片段长度约在1000-2000bp 推断 1、DNA复制过程中两条链不是同时合成的，存在一定的时间差 2、一条链先合成是连续的，称为前导链；另一条链是不连续的，称为后随链 3、一个酶分子同时完成前导链和后随链的复制，说明这个酶分子有两个活性中心，一个活性中心复制前导链的合成，另一个活性中心负责后随链的合成 DNA聚合酶的结构特点：双组分不对称 两个核心酶各负责合成一条链 DNA聚合酶的组装过程 链延伸过程中的酶 半不连续复制模型： 这个模型认为，由于两条新生链的生长方向是相反的，所以先导链和后随链不是同时进行的。先导链的复制先开始而且是连续的，当先导链复制出一定长度之后，后随链才开始复制，而且是不连续的。只有当前一个冈崎片段复制完成，暴露出下一个冈崎片段的引物引发位点之后，才进行下一个冈崎片段的复制.请看下图： 半不连续复制模型 2.3.3几种复制方式 复制方式不同于“复制机制” 线性DNA的复制： 复制叉式的复制 环状DNA的复制： θ复制 滚环复制 D环复制 不需要RNA引物的复制 2. 环状DNA双链的复制 John Cairns’ experiment In 1963, John Cairns: Grew E. coli in 3H thymidine Waited till cells were in the middle of replication Lysed the cells very very gently Spread the lysate on an EM grid Exposed the grid to X-ray film for TWO months Replication of the E. coli chromosome what Cairns’ experiment showed:θ E. coli has a circular chromosome E. coli has a single origin of replication In E. coli, replication and unwinding are simultaneous What Cairns did not show: ? Is replication unidirectional or bidirectional? ? Is the origin of replication unique? ? Where is the origin of replication located? θ复制的特点 多数环状DNA采用的复制方式 复制叉式复制，两个复制叉，双向等速或者不等速复制 有先导链和后随链之分 滚环复制 滚环型复制： 单向复制的特殊方式 T. Brown et al., 如：ΦΧ174的双链环状DNA复制型（RF） （1）模板链和新合成的链分开; （2）不需RNA引物，新生链在正链3‘－OH上共价延伸延伸 （3）只有一个复制叉;复制是单向的 D环复制 特殊的DNA复制方式 用蛋白质做引物的复制 腺病毒 腺病毒的DNA复制首先是以5′端结合有pTP的dCMP作为引物，以3′端的末端反向重复序列（ITR）为模