肠上皮细胞RNA干扰Hsp70基因转染条件的研究.pdfVIP

生物技术通报 研究报告· BIoTEcHNoLoGY8ULLETlN 20¨年第9期 肠上皮细胞RNA干扰Hsp70基因转染条件的研究 钟翔 李兴美 李伟 黄雪新 张莉莉 王恬 (南京农业大学动物科技学院，南京210095) 抽要： 干扰(RNAj)技术研究Hsp70升胃肠道的保护功能以度介导信号通路的机理打下基础。以24孔培养板培养IEc．6细胞，利用 ^圮t岫me 2000不同荆量比倒对特襄效率的影响，并进一步采用RT—PcR和wcnem blot吐og方法对HBp70干扰序列进行筛选。 试验结果表明．采用膳质体转染法可获得较高的转染垃率．其中蛆80nmoL，L 20∞组的转囊 F^M．BiRNA+l斗LLipofcct珊ine 效率最高(8s．77％)。计时4十不同靶往点，进行HsP70基田干涉．鳍果表明，4十姐中Hsp70mRNA的袁速显著下降．其中ol· i904组的基因表达极显著降低。westem b10ni”g的结果表明，oli90 终确定s0删∥L FAM—sjRN^+1斗L“po‰t蛐ine2000为最挂转染奈停，以oligo 佳RNA干扰靶基因。 美键词：肠上皮细胞RN^干扰H＆p70转袭 Researchon C帅ditionof Tra璐fection RNAInterfbrence Targeting GeneinIntestinal Cells Hsp70 EpitheHal Li LjWej Tja“ Zh仰gxi册g xjngmei HuangXu既j廿Zb肋g“liW日“g (函l虹p矿^“州＆缸附肌dn加地∥，№耐碍^咖础啪fu-沁r’f‘y，№岍昭210095) 舢Bh啊： Thm to tllet瑚1sfection RNA 6tll曲w肚e仰ductedinve8tigate eondhi佃for胡如“ng dete啪inethe afounda- ep曲el柚celb(IEc引∞u8，and HBP70．therefo”，itcouldlly highe砒c伍cien。y0fRNAin忙血眦e‘哪。d“g Ii帅fortIIeflIrIher嘲e叭honllIe of in tran小ctionof them讪od0f pmtectionHBp70ga5曲·intee6n蛆t眦t衄d H8p70 ce儿s岫且l by RNAinter如研nce．Ⅲc．6cenB ilI24一_e11 t-lc 0fcation 0f we砷cuhured plate．wIthhdp lip0眦，thcⅡ肌Bf∞tionFAM·siRN^峙 mentinto ofF^M—BiRNA蛐d