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郑州大学第五附属医院 科室管理诊疗规范文件 文件编号:ZDWFY-WSW 责任部门:检验科微生物室 项目名称：粪便细菌的培养 2.标本采集与运送 1标本采集 2.1.1标本采集尽可能在发病早期和使用抗菌药物治疗之前。在不同的时间采集2-3个标本可以提高致病菌的分辨率。 2．1.2自然排便采集标本时，取有脓血，粘液，组织碎片部分的粪便1-3克。液状粪便则取絮状物，一般取1-3毫升，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检 2.1.3直肠拭子采集粪便标本，适用于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围洗净，用无菌盐水，保存液或增菌液湿润的棉拭子插入肛门，成人约4-5厘米，儿童约2-3厘米，与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转，必须将拭子之于适当的运送培养基内送检。 2.1.4容器应是清洁，带盖，光口的，送检的标本中不能加防腐剂。 2.2标本运送 2.2.1粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2小时。如不能及时送检可加入ph7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24小时。 2.2.2直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2小时。 2.2.3高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。 2.2.4直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌水以防止沉淀。 2.3标本保存 不能及时培养的标本通常4-6℃保存，培养艰难梭菌的标本应保存在-20℃以下。用缓冲盐甘油溶液保存沙门氏菌和志贺氏菌的标本，保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2（100mg/L）. 3.标本镜检 粪便标本直接镜检找到大量多核白细胞，提示侵袭性致病菌感染。如果肠道菌群紊乱，革兰染色结果可以提示是酵母菌还是葡萄球菌感染。粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。因此，粪便标本一般不做直接涂片检查，只有检查霍乱弧菌以及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查。 3.1Loeffler氏亚甲兰湿片法 选择粪便标本有粘液的部分用于检查。用竹签将一滴亚甲兰染液与等量便均匀涂于载玻片上。盖上盖玻片2-3分钟，高倍镜下观察。如见到大量WBCS提示侵袭性致病菌感染，观察到大量单核细胞则与沙门氏菌感染有关。 3.2.革兰氏染色 制备一张薄的粪便涂片，采用常规革兰氏染色方法。镜下观察是否有大量WBCS，成丛的革兰氏阳性球菌，酵母菌。镜检如见革兰阳性杆菌，无荚膜，大多形成卵圆形芽孢位于菌体一端，提示艰难梭菌感染。 郑州大学第五附属医院 科室管理诊疗规范文件 文件编号:ZDWFY-WSW 责任部门:检验科微生物室 3.3水样粪便的标本，采用悬滴暗视野镜检，如发现细菌呈穿梭状极活泼运动，则考虑为弧菌感染。加入01群霍乱弧菌诊断多价血清或0139血清，显微镜下观察若运动停止则为制动试验阳性，应立即与当地卫生防疫部门联系，并做好患者消毒隔离工作。 4细菌培养及培养基的选择。 4.1腹泻病原菌常规检查。 腹泻病原菌种类繁多，实验室不可能对所有可能引起腹泻的病原菌都进行培养。为保证获得较高的检出率。可以对患者进行病原菌常规培养，包括沙门氏菌，志贺氏菌，气单胞菌，临单胞菌，弧菌，也包括引起菌群失调的金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌和酵母菌。 4.2培养基选择。 4.2.1沙门氏菌接种XLD,MAC，平板。 4 2.2志贺氏菌接种XLD,MAC，平板。 4 2.3气单胞菌接种XLD,MAC，血平板。 4.2.4临单胞菌接种XLD,MAC，血平板。 4.2.5弧菌接种碱性蛋白胨水增菌，35℃培养6－12h后，传代到TCBS平板上培养。 4.2.6铜绿假单胞菌接种XLD,MAC，血平板。 4.2.7金黄色葡萄球菌接种高盐甘露醇平板和血平板。 4.2.8EHECO157先接种XLD,MAC,平板，35℃培养18－24h后，挑选乳糖阳性菌再转种SMA平板。 以上接种平板均置35℃培养18－24h。 5.培养物鉴定 粪便标本操作流程（沙门菌与志贺菌属检查） 粪便或肛试子 分离培养 增菌培养 SS琼脂平板 麦康凯或中国蓝∕ 亚硒酸盐增菌培养基 GN增菌培养基 伊红美蓝琼脂平板 (适于沙门菌属) （适于志贺氏菌属） SS及麦康凯琼脂平板分离 三糖或双糖培养基 血清学鉴定 生化反应鉴定