产单核细胞李斯特菌actA基因的原核表达及其单克隆抗体的研制研究.pdfVIP

第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会2006年会议论文集 究金黄色葡萄球菌p溶血毒素生物学功能及开发金黄色葡萄球菌p溶血毒紊基因工程产品奠 定了基础。 参考文献略 霍乱弧菌OmpW的基因克隆、原核表达、基因免疫和 单克隆抗体的制备z 于福先2，范泉水l，李作生1·，邱薇l，张富强l，李丽红2，郑颖l，牵刚山l，黄勇l (1成都军区军事医学研究2云南农业大学动物科技学院) 霍乱是由霍乱弧菌(vibriocholeme)弓l起的急性肠胃性传染病，在我国被列为甲类传染病 之一，也是国际检疫传染病之一，曾经引起过七次世界大流行，给人们的生命财产造成了巨 大的损失。霍乱弧菌是弧菌属的一种，按照菌体(O)抗原的不同，可分为不同的血清型。 从1817至1992年的百余年间，先后发生六次世界性大流行。这六次霍乱的流行均是由Ol 群霍乱弧菌引起的。1992年lO月起，印度和孟加拉国相继发生典型的霍乱样腹泻病大流行， 随后流行范围在逐步扩大，从病人分离的菌株在当时已有的01--0138群霍乱弧菌诊断血清 均不发生凝集，因而被认为是一种新型的霍乱弧菌，命名为0139群霍乱弧菌。按世界卫生 组织(、ⅣHO)的规定，Ol群和0139群霍乱弧菌是引起霍乱流行的主要病原菌。但是非Ol 群和非0139群霍乱弧菌也可引起霍乱的散发或局部流行。霍乱弧菌有多种检测方法，Nandi 等于2000年应用PCR从霍乱弧菌OmpW基因获得的扩增产物以过氧化物酶标记制成核酸 探针，对众多细菌进行了杂交检测，结果显示OmpW探针对霍乱弧菌的特异性为100％，这 就提示了OmpW在霍乱弧菌各菌株间核酸序列保持不变，是霍乱弧菌合适的基因标志。本 研究以01群，小川型霍乱弧菌为研究对象，成功克隆了外膜蛋白OmpW基因，测序结果 表明01群，小川型霍乱弧菌与国际标准株相比，其基因同源性为99．24％，氨基酸同源性为 真核表达质粒免疫Balb／c小鼠，免疫三次后，取其脾细胞与同源的SP2／0细胞融合，以菌体 裂解液为检测抗原，经间接ELISA筛选，有限稀释法克隆获得了2株分泌霍乱弧菌外膜蛋 白OmpW抗体的杂交瘤细胞株，通过间接ELISA的方法检测证明，2株单克隆抗体均可与 霍乱弧菌抗原进行反应。因此，应用霍乱弧菌外膜蛋白OmpW制成的单克隆抗体，为快速、 特异、敏感的检测出霍乱弧菌提供了试剂。 产单核细胞李斯特菌actA基因的原核表达及其单克隆 抗体的研制 殷月兰l 董慧l 焦新安·焦红梅 顾志强 袁舟 张晨菊 征超峰 (扬州大学生物科学与技术学院， 江苏扬州，225009) 擒耍：本文利用PCR技术从血清型l／2a的产单核细胞李斯特茵Lm．4株中扩增出actA基因，经克隆筛选和 目的蛋白的表达．SDS电泳结果表明，actA基因在两种栽体中均获得表达，融合蛋白的大小分别约为 120KD和97KD．以纯化蛋白为材料进行了ActA单抗的研制，获得四株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株， 达产物进行特异性反应，且与Lm-4多抗血清的Western．blot结果一致．actA基因的原核表达及单抗的研制为 研究AetA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础，也为该茵鉴定提供了新试剂． 3105) 资助；通讯作者：Tel：86—514—7979091；Fax：86—514—7311 374；E—mail：xajiao日yahoo．COm ．313． 猪传染病 关键词：产单核细胞李斯特茵，acth基因，表达，单克隆抗体 产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes，Lm)是人兽共患李斯特菌病的病原，人 感染后能引发脑膜炎、脑膜脑炎、发热性败血性胃肠炎等临床症状，感染后发病死亡率约为 25％。Lm的致病性与它的侵袭力密切相关，有多种毒力因子与其侵袭力相关，包括ActA 氨基酸组成，成熟的蛋白为610个氨基酸，分