第3章 培养基.ppt

第3章 培养基;表3－1 常用的培养基配方;续表3－1 常用的培养基配方;续表3－1 常用的培养基配方;MS培养基是1962年Murashige和Skoog为培养烟草材料而设计的。特点是无机盐的浓度高，有加速愈伤组织生长的作用，能满足植物组织对矿质营养的要求。铵盐和硝酸盐含量高，比例也比较适合，也不需要添加更多的有机附加物，这是目前应用最广泛的一种培养基。但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求较低的植物，尤其不适合铵盐过高易发生毒害的植物。与MS培养基较为接近的还有LS培养基（Linsmaier和Skoog，1965）ER培养基（Eriksson，1965）。;与MS培养基相比，于1943年设计，1963年作了改良的White培养基则是一个无机盐浓度较低的培养基。它的使用也很广泛，同时它还非常适合于生根培养和胚胎培养。 B5培养基是1968年由Gamborg等为大豆组织培养设计的。它的主要特点是含有较低的铵盐，该营养成分可能对不少培养物的生长有抑制作用。 B5培养基在豆科植物上用得较多，也实用于木本植物。;马铃薯简化培养基是为适应经济条件较差的农村农科站和中学而设计的，既经济又适用，容易取材，有利于组培技术推广和普及。配制方法：称取定量的马铃薯（200g/L），洗净、切块、加一定量的蒸馏水煮沸半小时，用两层纱布过滤，滤渣用相同方法再煮一次，过滤，两次滤液不超过总体积的45%，然后加入其它附加成分，食用淀粉做凝固剂，绵白糖代替蔗糖。 培养基是否适合所培养的植物，可以通过实验进行筛选。必要时应该对培养基的成分进行调整，以此来获取良好的培养效果。;培养基中各种成分的浓度问题：;2. 培养基的成分;2.1 水分;2.2 无机营养物（无机盐）;植物所需元素的浓度小于0.5mmol/L的称微量元素。培养基中的微量元素主要包括铁(Fe)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)、氯(Cl)、硼(B)和钼(Mo)等。 为了某些植物组织培养的特殊需要有人还把钠(Na)、镍（Ni)、钴(Co)、碘(I)等也加入微量元素的行列。 有些成分的作用至今还不十分清楚，可人们仍然把它们加入培养基中，如碘(I)和钴(Co)等。 ;为了使用方便，无论是大量元素还是微量元素都常常是先配制成母液（即比实际培养基中的使用浓度高的贮存液），贮存在4℃冰箱内或在室温下短期存放。 Fe由于性质特殊，即很不稳定、易沉淀，需要在酸性条件下才能比较稳定，故在培养基配制时常常把Fe盐单独配制，且常以螯合物的形式以防止沉淀和帮助被植物吸收。 ;2.3 碳源和能源;2.4 维生素类 ;2.5 氨基酸及有机附加物;2.6 植物生长调节物质;2.6.1 生长素类;2，4－D对于愈伤组织的诱导和生长非常有效。但它趋向于抑制植物的形态发生，故在诱导再分化时就很少用它，一般多用NAA或IBA或IAA与一种细胞分裂素配合使用。 低浓度的2,4－D往往有利于胚状体的分化。;IBA和NAA广泛用于生根，并能与细胞分裂素互作促进茎芽的增殖。 NAA有利于单子叶植物的分化，而IBA诱导生根的效果最好。 生长素一般溶于95 ％酒精或0.1mol／L的NaOH中，以后者的溶解效果更好。;2.6.2 细胞分裂素类;常用的细胞分裂素类有：激动素(kinetin，简称KT，规范的化学名称是糠基腺嘌呤)、6－苄基腺嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT)、2-异戊烯腺嘌呤(2-iP)、吡效隆(4PU，CPPU)和噻重氮苯基脲(TDZ)。它们作用的强弱顺序为： TDZ，4PU ZT 2-iP 6-BA KT 在组织培养中通常使用人工合成的、性能稳定又价格适中的KT和6-BA 。;此外，赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)和多效唑(PP333)、矮壮素（CCC）、B9等生长调节物质也??用于组织培养中。;2.7 琼脂及其它固化剂;2.8 其他成分;2.8.2 硝酸银;2.8.3 抗生素;2.8.4 防止酚类物质污染的添加剂;防止酚类物质污染的添加剂：;3. 培养基的选择;（2）培养基中各种激素的浓度及相对比例 步骤：查阅资料→设计实验（将每一种拟使用的激素选择3～5个水平，再按随机组合的方式建立实验方案，如表2－2两种激素4种浓度的组合实验，然后再进行第二次激素配比实验表2－3）。 ;;;3.2 “广谱实验法” ;4. 培养基的配制;4. 培养基的配制;4.1 培养基母液的配制 ;4.1.1 MS培养基大量元素母液的配制;4.1.2 MS培养基微量元素母液的配制;4.1.3 铁盐母液的配制;4.1.4 维生素、肌醇和氨基酸母液的配制;4.1.5 植物生长调节物质母液的配制;4.1.5 植物生长调节物质母液的配制;配制好的各种母液应分别贴上标签，写明母液名称、配制倍数、日期，置于2～4℃的冰箱中保存。尤其对生长调节物