应用RNA干扰技术沉默NF-κB基因对肺癌A549细胞的影响.pdfVIP

广 西 医 科 大 学 学 报 2010 …‘， ●． ●． UNIVERSITY OFGUANGXIMEDICAL JOURNAL 王昌明 王绩英△ 曾锦荣莫碧文蒋 明 林云 韦江红 (广西桂林医学院附属医院呼吸内科桂林541001) 摘要 目的：运用RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术阻断肺癌细胞株A549中NF-KB p65基因表达，并研究该基因沉默 后对细胞增殖的影响。方法：实验以肺癌A549细胞株为材料，分为空白对照、脂质体对照以及siRNA干扰实验共3组。以体 外转录法合成dsRNA，并用脂质体转染A549细胞株，RT-PCR法测定肺癌A549细胞内NF-KB NA组具有明显抑制肺癌A549细胞NF-KBp65 制。结论：应用RNAi技术可以有效干扰肺癌A549细胞NF—xBp65的表达。 关键词 RNA干扰；NF-KB；A549细胞 中图分类号：R730．5 文献标志码：A 文章编号：1005—930X(2010)01一0062一03 lencerTMsiRNA 肺癌是当今世界上发生率和死亡率最高的恶性肿瘤之 Labeling 一，且呈上升趋势，70％的肺癌临床诊断已属晚期。尽管采 pofectaminTM 用了手术、放疗和化疗等综合治疗措施，由于转移和多药耐 cell cancer， 品。非放射性NF-KBp65转录因子检测试剂盒、核蛋白抽提 药等原因，非小细胞肺癌(non-smalllung cell NSCLC)5年生存率仍低于10％，小细胞肺癌(smalllung 及定量试剂盒为美国Chemicon公司产品。其余常用试剂均 cancer，SCLC)则低于3％。因此，迫切需要寻求新的有效的自行配制。 1．2 NF-KB 治疗方法。核因子NF-·cB(nuclearhctor-kappaB，NF-zB)是p65 近年来发现的转录调控因子，其最常见的形式是由p50和 cerTMsiRNAConstruction p65组成的异源二聚体，在绝大多数静止期细胞中以非活性 形式存在于细胞质中。活化的NF一*B信号通路可增强肿瘤CCTGTCTC一3’和5-AATATA 细胞对放化疗药物的抵抗力，从而产生耐药性。NF-xB信号CCTGTCTC一3。 通路的激活在许多人类肿瘤，如肝癌、肠癌、宫颈癌等的发生 1．3细胞培养和转染：A549细胞用含有10％小牛血清的 发展中起重要作用[1“]。 RPM 染前1d，在标准六孔板中按(3～8)×105个／孔的数量接种 RNA干扰(RNAi)是双链RNA介导的特异性基因沉默 现象，是目前研究基因功能强有力的工具之一[4]。本研究以 10％的小牛血清)，转染时细胞的汇合度要达到60％～70％。 siRNA介导NF-xB表达沉默，采用阳离子脂质体作为转染 试剂。观察siRNA导入后对人肺癌细胞株A549内的NF-KB siRNA p65表达的抑制作用以及其对肺癌细胞株增殖的影响，探讨 siRNA转染于A549细胞中。实验组分为NF-KBp65 将NF-KBp65作为基因治疗靶点的价值。 组，siRNA转染的终浓