翻译后修饰可能影响黄瓜花叶病毒2b蛋白抑制子活性及稳定性.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, February 25; 27(2): 212−218 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn ©2011 CJB, All rights reserved. 农业生物技术 翻译后修饰可能影响黄瓜花叶病毒2b 蛋白抑制子活性 及稳定性 1,3 1,2 1,2 李沫 ，贾燕涛 ，方荣祥 1 中国科学院微生物研究所 植物基因组学国家重点实验室，北京 100101 2 国家植物基因研究中心，北京 100101 3 中国科学院研究生院，北京 100049 摘 要: 黄瓜花叶病毒 ( Cucumber mosaic virus ，CMV) 编码的2b 蛋白具有RNA 沉默抑制子功能，为了研究翻译后修 饰对2b 功能的影响，利用反向PCR 定点突变方法对CMV-Q 株系2b 蛋白的 1 个预测的磷酸化位点 (S40) 和2 个预测 的泛素化/SUMO 化位点 (K22 ，K39) 进行了点突变，同时将点突变体插入植物表达载体。通过农杆菌共注射法对3 个 2b 突变体的抑制子活性进行了分析，结果证明，当S40 突变为A (2bS40A) 后，2b 抑制局部和系统沉默的活性均大幅降 低；当K22 突变为R (2bK22R) 后，2b 的抑制子活性无明显变化；而将K22 和K39 均突变为R (2bK22R/K39R) 后，2b 抑 制系统沉默的活性则大幅减弱。对叶片中2b 突变体的蛋白含量的Western blotting 检测表明，与野生型2b 蛋白相比， 2bK22R 在植物中积累水平变化不大，而 2bS40A 和2bK22R/K39R 的蛋白积累量则明显降低，说明K39 和 S40 位点在维持 2b 蛋白的抑制子活性及其在植物细胞中的稳定性方面起重要作用。 关键词: 黄瓜花叶病毒，2b 蛋白，翻译后修饰，抑制子活性，蛋白稳定性 Implication of post-translational modifications in suppressor activity and stability of the Cucumber mosaic virus 2b protein Mo Li1,3, Yantao Jia1,2, and Rongxiang Fang1,2 1 State Key Laboratory of Plant Genomics, Institute of Microbiology , Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China 2 National Center for Plant Gene Research, Beijing 100101, China 3 Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China Abstract: To gain insights into the function of potential post-translational modifications on the activity of the Cucumber mosaic virus (CMV)-encoded silencing suppressor protein 2b, one predicted phosphorylation site (S40) and two predicted ubiquitination/sumoylation sites (K22 and K39) in CMV-Q2b protein were individually or