蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较.pdf

中国畜牧兽 医 2015，42(2)：498—502 ChinaAnimalHusbandry VeterinaryMedicine doi：10．16431／j．cnki．1671—7236．2015．02．041 蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较 伊如格勒图，杨丽华，赵一萍，任秀娟，白东义，赵启南，芒 来 (内蒙古农业大学动物科学学院，呼和浩特 010018) 摘 要 ：本试验采集蒙古马新鲜粪便样 品，采用酚～氯仿抽提法和 2种细菌基 因组 DNA提取试剂盒法进行样品 中细菌基 因组 DNA的提取 。通过 DNA浓度和纯度 的测定 ，并将其作为模板扩增细菌 16SrDNAV3区特异性片 段对提取效果进行 比较 ，从而找 出更适合蒙古马粪便 中细菌基 因组 DNA 的提取方法 。结果显示 ，3种提取方法得 到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板，其中B试剂盒法提取的DNA数量较多，且纯度高，更适合用于提取 蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。 关键词 ：蒙古马 ；肠道细菌 ；总DNA提取 ；方法 比较 中图分类号 ：Q523 文献标志码 ：A 文章编号 ：1671-7236(2015)02—0498—05 ComparingtheM ethodsofTotalDNA Extractionfrom IntestinalBacteriainM ongolian Horse Yirugeletu，YANGLi—hua，ZHAOYi—ping，RENXiu-juan，BAIDong-yi，ZHAOQi—nan，MANGLai (CollegeofAnimalScience，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010018，China) Abstract：Inthisstudy，weextractedtotalDNA from freshfecalcollectedfrom Mongolianhorses through phenol—chloroform techniqueand tWObacterialgenomicDNA extraction Kits．To find moresuitablemethods，wehadcomparedtheconcentrationandpurityofDNA and thelandscape ofamplifyingthe16SrDNA V3region．Theresultsshowedthatallthreemethodscanbeusedfor DNA extractionfrom gutbacterialinMongolianhorse．M eanwhile，thequalityandpurityofDNA extractedbyB Kitwasthemosteffectivewhichcouldhemoresuitablefortheextractionofge— nomicDNA from gutbacterialandthesubsequentanalysisofthediversityofbacterialpopulation andbiologyexperimentsinM ongolianhorse． Keywords：M ongolianhorse；intestina1bacteria；totalDNA extraction；comparisonofmethods 蒙古马是 中国乃至世界最著名 的地方 品种之 DNA。目前尽管粪样 中提取细菌总 DNA 方法很 一 ， 属乘挽兼用型品种。能适应恶劣的环境及粗放 多，但是没有哪一种方法是被定为科学界的标准 ，每 的饲养条件 ，具有适应性强 、耐粗饲等特征_l1]。马是 一 种方法都有它的优缺点 ]。实验室常采用的细菌 单 胃草食动物，与反刍动物不 同的是马属动物属于 DNA提取方法有碱裂解法、CTAB法 、SDS裂解 后肠发酵，它 的肠道十分发达