盾叶薯蓣细胞悬浮培养生长特性的研讨.pdfVIP

J052 盾叶薯蓣细胞悬浮培养生长特性的研究 1 吴红利，袁丽红，杨红艳 (南京工业大学制药与生命科学学院，江苏 南京 210009) 摘 要 研究了接种量，不同碳源及蔗糖浓度对盾叶薯蓣悬浮培养细胞生长的影响。结果表明随 着接种量增大(种子液体积/培养液体积) ，细胞生长启动加快，延滞期明显缩短；在以葡萄糖、蔗 糖、果糖、山梨醇为碳源的培养体系中，蔗糖对细胞的生长最有利；在蔗糖浓度为 10～50 ｇ/ Ｌ 范围内，当蔗糖浓度为 40 ｇ/ Ｌ时，悬浮体系表现为最佳的生长状态，而当蔗糖浓度超过 40 ｇ/ Ｌ时，蔗糖就表现出基质抑制效应。 关键词 盾叶薯蓣，细胞悬浮培养，生长特性 盾叶薯蓣 （Dioscorea zingiberensis C.H. Wright ）为薯蓣科薯蓣属植物，是我国特有的薯 蓣种类，其根茎 （俗称黄姜）中薯蓣皂甙元含量较高。薯蓣皂甙元 （Diosgenin ）是合成皮 质激素类药物和避孕药的主要原料之一。水溶性皂甙制剂对治疗冠心病有效,可减少心绞痛, [1，2] 调节新陈代谢 。近年来对薯蓣皂甙元的需求剧增，导致了野生薯蓣的不合理采挖，使得 野生薯蓣资源面临枯竭；而人工栽培薯蓣一般需要3 －5 年的生长周期，且易受环境、季节、 [4] 虫害等因素影响[3] ，目前也面临品种退化、产量降低的危险 。近年来利用植物组织和细胞 [5] 培养技术生产次生产物，提高其含量成为医药界研究的热点之一 。在薯蓣的组织培养方面， 国外主要研究三角叶薯蓣，Kaul 通过三角叶薯蓣 （D. deltoidea ）悬浮培养生产了薯蓣皂甙 [6] 元,含量为 1.5% , 已获得专利 。而盾叶薯蓣是我国特有的薯蓣种，其薯蓣皂甙元含量在薯蓣 [7] 科植物中为最高 ，谢碧霞等通过盾叶薯蓣不同外植体(块茎、茎、叶、茎尖)诱导出愈伤组 [2] 织并筛选出高产系 。但对于薯蓣细胞悬浮生长特征的研究少见报道。本文研究了盾叶薯蓣 细胞在不同的接种量、碳源及不同的蔗糖浓度对盾叶薯蓣细胞悬浮生长的影响，为发酵培养 盾叶薯蓣细胞和研究次生代谢产物提供理论依据。 1材料与方法 1.1盾叶薯蓣悬浮细胞继代培养： 悬浮细胞继代培养选用的培养基是 MS液体培养基附加 3％蔗糖和添加激素 NAA 2.0 mg/L, BA 0.2 mg/L，灭菌前用 1 mol/L NaOH或 1 mol/L HCl调节pH值5.8～6.2，121℃ 灭菌 15分钟。接种后于 （27±0.5）℃黑暗条件下培养，每隔 14～16天继代一次。 1.2盾叶薯蓣细胞悬浮培养条件 试验采用250mL的三角瓶，装液量为50mL，培养液pH值调至5.8。进行接种量试验时 采用浓度为 30g/L的蔗糖，接种量设计为 10％、20％、30％、40％、50％（体积比：种子 液体积/培养液体积）；进行碳源试验时，蔗糖、葡萄糖、果糖、山梨醇的浓度均为30g/L； 进行蔗糖浓度试验时，蔗糖浓度分别设计为 10、20、30、40、50g/L。接种后于 （27±0.5） 作者简介：吴红利 （1979－），女，湖北人，硕士。 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 ） ℃黑暗条件下振荡培养，转速为 110～120 r/min。每个处理设 3个重复。培养一定时间后 收获测量悬浮细胞生物量。 1.3生物量的测定——干重法 取悬浮培养物于滤纸上，洗涤，置于50℃烘箱中烘至恒重测干重。 1.4培养基中残糖的测定 [8] 蔗糖、葡萄糖及果糖的测定均采用蒽酮法 。 2 结果与分析 2. 1不同接种量对悬浮培养盾叶薯蓣细胞生长的影响 细胞接种量对悬浮培养细胞而言是重要的生物影响因子,对细胞的生长过程有非常显 著的影响,从图 1