阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数实时定量PCR检测方法的建立.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2012，40(10)：5800—5802，5807 责任编辑 朱琼琼 责任校对 李岩 阪崎克罗诺杆菌 中转座子拷贝数实时定量 PCR检测方法的建立 王菲，杜欣军，张荣，徐桂香，王硕 (天津科技大学食品工程与生物技术学院，食品营养与安全省部共建教育部重点实验室天津 300457) 摘要 [目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法。[方法]以单拷贝持家基 因atpD作为内参基因，建立同 时含有单拷 贝持家基因atpD和EZ—TN5转座子的重组质粒；建立atpD基因与Ez—TN5转座子实时定量检测的标准曲线，并利用所建立 的标准曲线，对3株阪崎肠杆菌突变株 中atpD基因和EZ—TN5转座子的拷贝数进行检测，并计算其比值。[结果]atpD基因与Ez—TN5转 座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0．999和0．998；3株突变株中atpD基因和Ez—TN5转座子拷贝数比值分别为0．98、1．17 与0．91，证明突变株中转座子为单拷贝。[结论]该研究所建立的实时定量 PCR方法实用性强，可替代 Southern杂交用于不同细菌 中 EZ．TN5转座子拷 贝数的检测 关键词 转座子；拷贝数；实时定量PCR；阪崎克罗诺杆菌 中图分类号 S183；Q503 文献标识码 A 文章编号 0517—661l(2012)10—05800—03 EstablishmentofReal-TimeQuantitativePCRMethodforDeterminationofTransposonCopyNumberjnCronobactersakazakii wANGFeietal (KeyLaboratoryofFoodNutritionandSafety，MinistryofEducation，TianjinUniversityofScience＆Technology，Tianjin 3OO457) Abstraet )Objective) isstud)raimedtoestablishtheReal—TimequantitativePCRmethodfordeterminationoftransposoncopynumberin c．sakazakii．[Method]Withsingle—copyhousekeepinggeneatpDasthereferencegene，recombinantplasmidcontainingbothsingle—copy housekeepinggeneatpD andEZ—TN5transposonwasconstructed：basedontheestablishedstandardcurvesofrreal—timequantitativedetection ofatpD geneandEZ—TN5 transposon．copynumberofatpD geneandEZ-TN5transposoninthreeC sakazakiimutantswasdetectedandthe ratiowascalculated．1Resuh1Correlationcoeffieientsofthestandardcurvesforreal—timequantitativedetectionofatpD geneandEZ—TN5 transposonwere0．999and0．998，respectively；theratiosofcopynumberofatpD geneandEZ—TN5transposoninthreeC．sakazakiimutants were0．98，1．17and0．91，respectively，whichindicatedthatEZ—TN5transposonin￡ sakazakiimutantswassingle—copy．[Conclusion] Real—timequantitativePCR method establishedinthisstudyhadhighavailabilityandcouldreplacetheSouthern blotmethodtodetectthecopy nunlberofEZ—TN5transposonindifferentbacteria． Keywords Transposon：Copynumber；Real—timequantitativePCR；Cronobacte