分析用酶的分子操纵.pdfVIP

无锡 轻 工大 学学报 V.I.18.No 奶 比卷第 5期 Sep..1999 1999年 9月 journalofWuxiUniversityofLightIndustry 文章编号:1009-038X(1999)050118-04 分析用酶的分子操纵 张先恩 (中T科学Sa氏.;:;^毒r究所，胡北武汉 430077) 滴要:Iq]述了蛋白质 I:程议计的实%f.原理、技术及应用研究 关键 词;蛋自质工程设计触枝沐11用动究、}- 分子过 “{1_-, 中图分类号:TQ931 女献标积胡 :A一 七一 反一招 分析生物技术是现代生物技术群中一个新的 使人们可以进行分子设计或分子修饰来定向加工 分支，涵盖以分析、诊断及检侧和生物信息纵深获 或制造酶蛋白川.图1表示了蛋白质工程的设计过 取为目的的生物分子高级加工技术.它以方法和技 程. 术为体现形式，在生命科学研究和相关应用领域如 临床诊断、生物工业过程控制、食品质量评价、药物 分析、环境监测、口岸检疫和军打等领域具有重要 作用. 酶法分析是分析生物技术13主要的内容之一， 它包括酶试剂盒、酶联免疫(ELISA),酶标DNA 探针和酶传感器(Enzymesensors)等.分析用酶之 所以被广泛应用，归功于酶分子的高度特异性和高 催化效率，使微观生物学反应过程得以放大.然而， Ke然酶蛋白分子并非完美无缺，例如 娇“嫩11福是它 开发 们共有的天然4性.当酶被用来制作生物器件(如 生物芯片、生物传感器、分子传感器、分子机4等) 图1 蛋白质工程设计过程 时，要求其具有长期的稳定性，因而对酶蛋白实施 分子改造具有I阔的发展空rI0I. I 蛋白质工程设计的实验原理及技 蛋白质的分子加 L技术包括蛋白质水平和纂 米 因水平.蛋白质水平主要指用化学方法对酶进行化 学合成或修饰，其中包括经典的固定化酶方法.化 蛋白质工程设计可以采用定位突变((Sitedi- 学法自巳隆较大，而且作用剧},!.酶的回收活力低; rectedmutagenesis)和随机突变(Randommueage- 基因水平修饰是通过DNA分子操纵改变蛋白质 nests)两种方式.前者需要知道蛋白质 一级结构和 一级结构，从而改变蛋白质的功能.若干年以来，通 编码基因序列，并根据蛋白质空间结构知识来设计 过采用X衍射和NMR等技术对蛋自质分子洁构 定位突变，它通过核普酸的置换、插入或删除来进 进行研究，酶的结构与功能得以在分子水平和超分 行，随机突变又称非定s突变，已经被采用 了许多 子水平进行阐述，为蛋白质 匕程设计提供犷依据， 年.在尚不知道蛋白质空间结构，或者根据现有的 收稿 日期 1999-06-3o;修订日期:1999-0155 {18 蛋白质结构知识尚不能进行有效的定点突变时，非 蛋白质的基因操纵的新近主流技术包括聚合 定点突变仍不失其重要意义.传统的非定点突变采 酶链式反应((PCR)介导的基因点突变(如overlap- 用化学诱变法和物理法，可以在基因组中广泛地制 extension)t21,噬菌体展示(Phagedisplay),DNA 造多点突变，突变的位置完全是随机的.近年出现 Shuffling(暂译 “随机搅乱重组”)和融合蛋白工程 的随机搅乱重组(DNAShuffing)技术，能够在单 等.图2给出Overlap-extensionPCR介导的点突 个基因内部成功地制造多点突变. 变原理.