内含肽-弹性蛋白介导的人溶茵酶在毕赤酵母中的表达.pdfVIP

第 35卷第 1期 Vo1．35NO．1 2014年 3月 M ar．2O14 内含肽一弹性蛋 白介导的人溶茵酶 在毕赤酵母中的表达 王安平 ，朱善元 ，吴 双 ，王永娟 ，左伟勇，洪伟鸣 (江苏农牧科技职业学院 ／江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏 泰州 225300) m 摘 要 ：将人溶菌酶、内含肽 、弹性蛋 白3个基 因串联插入 巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体 pPIC9K 中，获得重组质粒 pPIC—MIEIYZ，经 PnieI酶切线性化后 电转化毕赤酵母 GSI15，经 G418筛选阳性克隆，并用 甲醇诱导表达 ，以探讨内 扬 州 m含肽一弹性蛋 白介导 的人溶菌酶在毕赤酵母 中的表达情况 。结果表 明：SDS—PAGE和 Westernblot证实表达的融合蛋 白 托 U 分子量正确 ，抑菌试验表明融合蛋白对微球菌具有 良好 的抑菌效果 。说 明融合基 因在毕赤酵母 中成功表达 ，为后继的纯 化工作及新型毕赤酵母表达载体的构建奠定基础 。 关键词 ：人溶菌酶 ；毕赤酵母 ；内含肽 ；弹性蛋 白 中图分类号 ：Q 556 ．2 文献标志码 ：A 文章编号 ：1671～4652(2O14)01—0022—04 与 ∞ 生 命 科 Expressionofhuman lysozymeinPichiapastorismediatedbyintein-ELP 学 版 Ⅲ WANGAnping，ZHUShanyuan，wUShuang，WANGYongjuan，ZUOWeiyong，HONGWeiming (JiangsuAgri—anim HusbandVetColl／VetBio—pharm，JiangsuProvKeyLaborof ∞ hightechRS，Taizhou225300，China) ABSTRACT：TostudytheexpressionofhumanlysozymeinPichiapastorismediatedbyinteinandElastin—likepolypeptide (ELP)，thehiYZ intein—EIP genewasclonedintotheyeastsecretoryexpressionvectorpPIC9K tOconstructtherecom— binantplasmidpPIC—M IELYZ．ThentherecombinantplasmidwastransformedintoP．pastorisGS115afterdigestedby restrictionenzymePnieI，positivecloneswerescreenedwithG418resistanceforexpressioninducedby0．5％ methano1． SDS—PAGE andW esternblotconfirmedthecorrectmolecularweightofrecombinantprotein。antibacterialassayshowed thatrecombinantproteinhadobviousantimicrobialactivityagainstMicrococcus．Theseresultsshow thatthefusiongene hasexpressedsuccessfullyinP．pastoris，andlaythefoundationforSubsequentpurificationworkandconstructionofnew Pichiapastorisexpressionvector． KEY WORDS：hLYZ；Pichiapastoris；intein；EIP 人溶菌酶(hLYZ)属于C型溶菌酶，即鸡卵清溶菌酶(cLYz)，参与机体的防御反应，有抗感染、抗肿 瘤和免疫调节的作用 ，具有潜在的临床应用价值。通常人溶菌酶是从人乳或胎盘 中少量提取 ，由于来源 困难 ，提取方法复杂 ，不能进行