替莫唑胺白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学研究.docVIP

精品论文 参考文献 替莫唑胺白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学研究 （浙江大学医学院附属儿童医院 浙江 杭州 310003） 　　【摘要】 目的：研究替莫唑胺白蛋白纳米粒（TMZ-BSA-NPs）经大鼠尾静脉注射给药后的药物动力学特性。方法：制备TMZ-BSA-NPs和TMZ-Sol，给药后HPLC测血药浓度并计算、比较二者的药动学参数，研究TMZ-BSA-NPs的药代动力学特性。结果：经药动学参数计算，TMZ-Sol在体内的代谢过程符合二室模型，TMZ-BSA-NPs的代谢过程符合单室模型。结论：经药动学参数分析，TMZ-BSA-NPs的生物利用度好于TMZ-Sol，TMZ-BSA-NPs能够发挥更好的药效并且减少不良反应的发生。 　　【关键词】替莫唑胺；白蛋白；纳米载体；血浆药代动力学 　　【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）35-0048-02 　　替莫唑胺可有效透过血脑屏障，直达病灶，是公认的治疗效果最好的抗胶质细胞瘤药物[1]，现阶段国内的替莫唑胺药物都是胶囊制剂，而手术患者常不适用固体药物，因此有必要改用其他给药方式。由于TMZ在水中溶解性差、水溶液稳定性差，本研究根据纳米载体具有缓释性、特别是能够有效传递水难溶性药物的特点，使用BSA制备TMZ-BSA-NPs，考察其药代动力学行为，为其缓释、减毒的特性提供实验依据。 　　1.实验材料 　　1.1 仪器与试剂 　　Agilent1200高效液相色谱仪；Agilent Extend-C18色谱柱（4.6mmtimes;250mm，5mu;m）；替莫唑胺（纯度gt;99%）；牛血清白蛋白（纯度98%）；其他试剂均为分析纯。 　　1.2 实验动物 　　SPF级雄性SD大鼠，体重300plusmn;30g（浙江中医药大学实验中心提供)。 　　2.方法 　　2.1 血药浓度测定 　　2.1.1样品制备 雄性大鼠12只，随机分成各6只的两组。对照组按8mg/kg剂量TMZ-Sol尾静脉注射给药，实验组按同样剂量TMZ-NSA-NPs给药，给药后5，l0min和0.5～2.0h（每0.5h），2.0h～4.0h（每1h），4h～14h（每2h）股动脉插管取血1mL，3500rpm/min离心20min，分离血浆200mu;L，加100?g/mL甲硝唑溶液25?L，酸化后置-20℃储存备用。 　　2.1.2色谱条件 取样本200mu;L置离心管中，用600mu;L乙酸乙酯提取两次，涡流混合3min，3500r/min离心5min，取上层液于另一离心管中，40℃N2吹干，加100mu;L流动相（0.5%乙酸-甲醇85：15）溶解残渣，上样20?L，柱温：25℃，检测波长：329nm。 　　2.1.3对照品储备液 精密称取TMZ标准品10.0mg，置50mL容量瓶中以0.5％冰乙酸溶解定容成TMZ标准储备液，4℃贮存备用。 　　2.1.4专属性考察 选择含内标、TMZ标准品、内标与TMZ标准品的大鼠空白血浆上样测定考察方法专属性。 　　2.1.5血浆标准曲线 将TMZ标准储备液稀释为50、20、10、2、1、0.5?g/mL后，吸取各浓度稀释液50?L，40℃N2吹干，加200mu;L空白血浆及25mu;L内标，上样后记录峰面积，求标准曲线方程。 　　2.1.6精密度与回收率 　　量取1、10、50?g/mLTMZ储备液50?L，40℃N2吹干，加200mu;L酸化血浆上样，1d测定5次计算日内精密度，连续测定5d计算日间精密度；上样测定TMZ储备液，根据TMZ的测定浓度计算回收率。 　　2.2纳米胶体溶液配制 　　水相：称取2.5gBSA，溶解于50mL蒸馏水，调pH到5.4并用TMZ饱和备用；油相：精密称取150mgTMZ，200mgGTCC并加2mLCH2Cl2；将水相加入油相，在750psi下循环10次，即得BSA纳米胶体溶液。 　　2.3 药动学数据分析 　　选择DAS软件2.1版进行药动学参数计算。 　　3.结果 　　3.1 血药浓度测定结果 　　实验组和对照组药-时关系见图1，药代动力学参数见表1。 　　 　　经DAS程序计算，对照组药动学过程符合二室模型，实验组符合一室模型。实验组Cmax小于对照组，Tmax、MRT（0-infin;）、AUC（0-t）均大于对照组。 　　3.1.1专属性考察 专属性考察色谱图见图2。 　　图2 专属性色谱图 　　 　　图中可见内标甲硝唑的保留时间约在9min，TMZ的约在6min，图2-3中甲硝唑和TMZ分离良好，说明在该色谱条件下方法专属性强。 　　3.1.2血浆标准曲线 以