原卟啉Ⅸ促进胰岛素从单体、二聚体自组装成六聚体研究.pdfVIP

2∞2年 高分子液晶态与超分子有序态研究进展 华中科技大学出版社 IO月 Advancesin and ISBN Crystalline 7-5609．2807-2 Liquid PolymersSupramolecules 原卟啉IX促进胰岛素从单体、二聚体自组装成六聚体· 吴德有陈益超徐辉碧 刘长林“ 华中科技大学化学系武汉430074 ■要 自我缔合是胰岛素的一个显著特性，胰岛索以六聚体的形式稳定存在，而以单体的形式 发挥生理功能。金属玎卜啉通过配位等弱相互作用结合到合成肽和合成蛋白中，促进蛋白质自缎装 成有生物功能的天然结构。原卟啉Ⅸ与胰岛素结合也促进胰岛素单体、二聚体在碱性条件下自 组装形成稳定的六聚体。在这种六聚体中，原卟啉Ⅸ与原胰岛素中及外加的锌离子配位形成锌 卧啉，而胰岛素作为锌卟啉的轴向配体。原卟啉Ⅸ可能是一种促进胰岛素变构并自组装的新配 体。 关■词胰岛素，原卟啉Ⅸ，自组装 1．引育 胰岛素是治疗糖尿病的最有效药物之一，一般以缔合物的形式存在，只有在浓度很低时， 如在血液中的浓度约为10-10—10‘11molL4时，才能以单体的形式存在。在较高浓度时，它主 要以二聚体的形式存在Ⅲ。在中性pH并有压2+时，胰岛素自组装成二锌六聚体。二锌胰岛 素六聚体由三个等价的二聚体组成，它的稳定在很大程度上依赖位于六聚体三重轴上的二个 Zn2+[21。 一般认为影响胰岛素从单体至U-．-聚体缔合的主要因素有两个pJ：其一是两个胰岛索单体 间非极性氨基酸之间的疏水相互作用，其二是两个B链C．端的p．折迭肽链之间的相互作用。 而从二聚体到四聚体和六聚体的缔合除了以上二个因素外，还和溶液中是否含有一定量的 zn。+以及溶液的pH值有关。 原卟啉Ⅸ(PPⅨ)是最常见的天然大环配体之一，二价铁的配合物是血红蛋白，肌红蛋 白和细胞色素c等的辅基。含Fe驯¨，C02+和M92+的卟啉配合物在电子转移、氧传输、光合 作用中起关键作用14J。在人工设计金属肽和金属蛋白中引入PPIX，不仅使其自组装稳定结构， 而且还赋予其生物功能【5l。胰岛素六聚体是一个变构蛋白，变构配体能使胰岛素六聚体更稳 定。在实验中，我们发现有办“存在时，PPIX促进胰岛素六聚体的生成和稳定，PPIX可能 ·国家自然科学资助项目(No ¨通讯联系人 是一种新的胰岛素变构配体，促进胰岛素组装成六聚体，这对开发新型胰岛素制剂具有理论 意义和实用价值。 2．实验部分 2．1试剂、仪器 胰岛素购自徐州万邦生物制药厂，原卟啉Ⅸ酸、Iris碱、甘氨酸购自Sigma公司，葡聚 糖SephadexG50购自Pharmacia公司，其它化学试剂均为分析纯或可得到的最高纯度的试剂。 Bio PE公司UV-240型紫外一可见分光光度计及Lambda 4．0软件系统，Jubalo恒温水浴装置。 透析袋DM8，20，27(分子量8000—10000)(美国)。 2．2脱锌曩岛素(歧岛素簟体、：聚体)的制备 L1 toolL1 胰岛素溶液用二次水配制，加入少量0．01molNaOH水溶液促进溶解。0．05 molL1 Tris-HCl缓冲溶液配制。将胰岛素溶液放入透析袋中，置 EDTA溶液用pH8．2的0．05 mol 于EDTA透析液中透析，更换透析液连续透析三次，每次八小时以上。再用pus．2的0．05 L1Tris-HCl缓冲溶液透析，更换透析液连续透析4次，每次6小时以上，所得胰岛素溶液 在冰箱中(0C)保存