色谱分析生物样品的制备技术.pdfVIP

! 第三章 生物样品的制备技术 ).*- 第三章 生物样品的制备技术 第一节 生物样品的采集与细胞破碎 生物样品通常是指植物的花、叶、茎、根、种子等等；动物（包括人）的体液（如尿、血、唾液、 胆汁、胃液、淋巴液及生物体的其他分泌液等），毛发、肌肉和一些组织器官（如胸腺、胰腺、肝、 肺、脑、胃、肾等）以及各种微生物。欲分析的组分常有植物体内的营养成分、农药残留等等；动 物体内的药物及代谢产物、糖类及有关化合物、脂类及长链脂肪酸化合物、维生素及辅酶类化 合物、核苷、核苷酸及其衍生物、磷酸酯类化合物、固醇类化合物、胺、酰胺、氨基酸、多肽、蛋白 及其衍生物和某些生物大分子（分子量在数千到数百万的生物大分子）。这些欲测组分中大多 数都可用色谱方法进行分析测定，其中用的最多的是 、 、电泳和毛细管电泳分析，一些 !"#$ %"$ 小分子化合物也可直接或衍生化后用%$ 分析。当欲测组分存在于体液或细胞外时可采用各 种萃取方法将欲测组分提取后制备成适合于色谱分析的样品。也可将干扰组分（如蛋白质、 &’(、多糖等等）沉淀除去，然后再将欲测组分制成适合于色谱分析的样品。当欲测组分在生 物细胞内时，首先就要将细胞破碎，将欲测组分释放出来后，再采用萃取或沉淀等方法将欲测 组分制备成适合于色谱分析的样品。本节主要介绍一些用于生物样品制备技术的特殊技术， 包括细胞的破碎、生物大分子的提取、蛋白质的沉淀和微透析技术。 一、生物样品的采集 由于生物样品来自于动、植物活体，故生物样品与自然界中的其他样品有所不同，采集样 品的方法也有所不同，一般可采用注射器吸取，手术刀、剪切割等方法采集。采集生物样品时 要注意以下几个问题： （）生物样品的采集有时是在活体上采样，采样量不可能很大，如体液，有时只能采集几微 ) 升，最多也就几毫升，器官组织有时也只能采集几毫克。由于样品量很少，所以特别要注意样 品的代表性。同时，又由于生物活体总在新陈代谢，要注意采样的时机。 （）要注意采样部位的准确，特别是动物的器官组织，一定要认准。 * （）生物样品一般都有一定的生物活性，样品采集后要立即加以处理，如取好血样后要立 + 即加抗血凝剂，取好某些器官组织后要立即加一些防腐剂，或者立即加以速冻处理（动物样品 常用）或脱水处理（植物样品常用）。 （）生物样品的采集大部分可在实验室内进行，采样工具要经过消毒，最好是在无菌的条 , " # !4.3 第十篇 色谱分析样品的处理 件下采样。 二、细胞的破碎 当欲测组分（主要是各种多肽激素、各种酶以及各种基因工程的产物如干扰素、胰岛素、生 长激素等等）存在于生物体细胞内及多细胞生物组织中时，需在分析测定它们之前将细胞和组 织破碎，使这些欲测组分充分释放到溶液中去。不同的生物体，或同一生物体的不同组织，其 细胞破碎的难易程度不一样，使用的方法也不完全相同。如动物胰脏、肝脏、脑组织一般比较 柔软，用普通的匀浆器研磨即可，肌肉及心脏组织较韧，需预先铰碎再作成匀浆。植物肉组织 可用一般研磨方法，合纤维较多组织则必须在捣碎器内破碎或加砂研磨。许多微生物均具有 坚韧的细胞壁，常用自溶、冷热交替、加砂研磨、超声波和加压处理等方法。总之，破碎细胞的 目的就是为了破坏细胞的外条体细胞内含物有效地释放出来，获得有效的提取。细胞破碎的 方法很多，按照是否存在外加作用力可分为机械法和非机械法两大类（表!" # $ # !） 表!" # $ # ! 细胞破碎方法 细胞的破裂 机械的 非机械的 ! ! ! ! ! !