难降解有机物对白腐真菌P450的诱导研究.pdfVIP

持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 难降解有机物对白腐真菌P450的诱导 宁大亮1，曾斌2，王慧p，庄芫1 (1清华大学环境科学与工程系环境模拟与污染控制国家重点联合实验室，北京，100084； 1．引言 白腐真菌的模式菌种黄孢原毛平革菌(Phanerochaete 二嗯英、DDT、氯丹、毒杀芬和三硝基甲苯等许多持久性有机污染物都有明显的降解功能，其酶学 机制是持久性污染物生物降解研究的热点问题。在大量研究揭示该真菌胞外酶重要降解作用的同 平革菌基因组的全序列分析，发现了超过150个功能未知的P450基因(酵母菌只有3个)，而且 这些基因在典型的培养条件下均能顺利转录表达，然而其具体功能尚未明确。抑制剂试验和基因水 平的研究显示了P450酶系与该真菌对许多污染物的降解作用之间存在密切关系，但是在蛋白质水 平，直接分离胞内P450酶液的研究仅仅在鉴定苯并(a)芘羟化酶P450上有所突破，此后鲜有报道。 本课题组致力于探究白腐真菌P450对难降解有机污染的反馈及其降解功能，本文将报道本课题组 对该真菌P450诱导研究的最新进展。 2．材料与方法 2．1真菌与试剂 白腐真菌采用黄孢原毛平革菌BKM．F．1767(ATCC24725)菌株；试剂均为分析纯试剂。 2．2真菌培养与P450诱导 冷藏的菌种接种到土豆琼脂固体培养基置于37。C恒温活化培养6～8天使用。经过活化培养的 诱导剂在培养60h后投加，诱导24h后收集菌体，提取微粒体酶液，检钡IJP450含量。 2．3微粒体酶液制备 经缓冲液清洗2次后重悬于缓冲液中获得微粒体酶液，蛋白浓度控制在5～7mg·mL一，．80℃保存待 测。 2．4微粒体酶液中P450检测 算。用Bradford法对酶液进行蛋白定量后计算微粒体中单位蛋白的P450含量。 119 持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 3．结果与讨论 各种污染物对黄孢原毛平革菌P450的诱导作用如图1，诱导条件均为相应物质的可降解条件。 6∞ 6∞ 5∞ 5∞ 4∞ 4∞ 3∞ 3∞ 2∞ 2∞ l∞ l∞ 皿嘲．．∞g．10吕d／删如避寻基霉器 O O u 乏 王 ； 备 室 圣： 曼 曼 兰之 圣： 。昌 垦 葶 琶 基 基 重 壬 ＆ 6 诱导剂 圭诱导剂 (b) 表l 诱导作用研究中各类物质投量、投加方式及真菌破碎方式 ∞O 编号 物质 投量 溶剂破碎法备注