解毒通络保肾胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏MCP1表达的影响研究.pdfVIP

1054 增强自主创新能力 促进吉林经济发展 解毒通络保肾胶囊对实验陛糖尿病大鼠肾脏 MCP一1表达的影响 朴春丽 邓 悦 姜 茹 南 征 何 泽 (长春中医学院附属医院内分泌科长春130021) 摘 要：目的：研究解毒通络保肾胶囊对链脲菌素糖尿病(DM)大鼠肾组织中单核细胞趋化蛋白一1 (MCP一1)表达的影响。方法：以链脲菌素诱导的糖尿病大鼠为动物模型，采用免疫组化及RT—PCR技术检 测各组肾小球中MCP-1的表达水平。结果：解毒通络保肾胶囊能明显改善糖尿病大鼠一般状态．降低尿 蛋白，改善肾功能，减少肾小球中MCP一1蛋白及基因表达。结论：解毒通络保肾胶囊的肾保护作用可能与 减少肾小球中激活的MCP—l表达，减轻肾组织中单核巨噬细胞(ED一1)浸润有关。 关键词：解毒通络保肾胶囊糖尿病大鼠MCP一1表达实验研究 糖尿病肾病(DN)进展的重要特征是炎性单核巨噬细胞广泛浸润肾组织引起的细胞外基质(ECM)堆 积、基底膜增厚(GBM)，从而发展为肾小球硬化。MCP一1是单核巨噬细胞特异性趋化因子，对单核巨噬细 胞有很强的趋化激活作用，研究发现MCP-I参与DN发生发展的多个环节，用特异性的抗MCP一1抗体可 阻断其对单核巨噬细胞的趋化作用，减少ED～1在肾组织的浸润【l】，延缓DN的进展。 解毒通络保肾胶囊具有减少DM大鼠尿蛋白排泄、减轻肾脏病理损伤、保护肾功能的作用。本实验着 重探讨解毒通络保肾胶囊通过抑制DM大鼠肾脏MCP一1表达，进而减少ED一1浸润，发挥防治DN发生 发展的作用，旨在为DN的抗炎治疗提供实验依据。 1材料与方法 1．1 动物模型的建立与分组 52 只i模型制作组单次腹腔注射STZ mol／1枸橼酸缓冲液溶解，pH4．2)，正常对照组 mg／kg(临用前用0．1 仅腹腔注射等体积上述缓冲液。注射STZ 72h后，尾静脉采血测空腹血糖并同时测尿糖，血糖≥16．7 mmol／l，尿糖++十以上者列入DM观察对象。将造模成功的45只雄性大鼠，按体重、空腹血糖随机分为DM 模型组、解毒通络保肾胶囊处理的中药实验组、苯那普利处理的阳性对照组，每组15只。 1·2给药方法 ‘ 给药途径为分别将临用前配成的混悬液灌胃，中药实验组按59，l(g体重给解毒通络保肾胶囊浓缩液， 阳性对照组按15mg／kg体重给苯那普利混悬液，正常对照组和DM模型组则灌服等体积饮用水，连续给药 12周，每Et上午一次。动物单笼饲养，自由进食饮水。 1．3检测指标及方法 (1)生化指标检测：给药12周末，用代谢笼收集24h尿量，次日将大鼠乙醚麻醉下眶后静脉采血，留 取血尿标本检测空腹血糖、血尿肌酐、24h尿蛋白定量，并参照有关公式计算内生肌酐清除率(Ccr)。 (2)肾组织病理学观察：采血后立即打开腹腔游离肾脏称重后，取一部分肾皮质切成小块，立即置人 2．5％戊二醛内．1M二甲胂酸钠缓冲液(pH7．4)固定后制备电镜标本。部分肾脏皮质立即置入新配置的10％ 吉林省第四届科学技术学术年会 1055 中性福尔马林液固定，石蜡包埋，制成4斗m切片。进行PAS染色，光镜下观察肾组织形态学改变。 肾小球视野，分别检测每个肾小球视野内MCP一1、ED一1阳性细胞数，最后以每组的均值进行比较。 mRNA：以GAPDH作对照，用这对引物可扩增出长度为308 (4)RT—PCR技术检测肾组织MCP一1 bp 的GAPDHeDNA片段。引物由北京鼎国生物技术发展公司合成。 1．4统计学处理 数据以元±s表示，采用SPSS11．5软件进行方差分析检验。以P0．05为有显著性统计学意义。 2 结果 2．1 各组大鼠生化及免疫组化、MCP一1mRNA指标变化情况 见表1。 表1 以各组大鼠1