解藻酸弧菌株ATCC17749中海藻酸裂解酶基因的克隆与鉴定研究.pdfVIP

V0L39NO．1 华 东 理 工 大 学 学 报 (自然 科 学 版) JournalofEastChinaUniversityofScienceandTechnology (NaturalScienceEdition) 29 2O13一O2 文章编号 ：1006—3080(2013)01—0029—06 解藻酸弧菌株 ATCC17749中海藻酸裂解酶 基因的克隆与鉴定 胥晴晴， 朱云霞， 王克平 ， 叶 江， 张惠展 (华东理工大学生物反应器工程 国家重点实验室，上海 200237) 摘要：以解藻酸孤菌株 (Vibrioalginolyticus)ATCC17749为研究对象，利用生物信息学寻找 并预测得到 5个可能的海藻酸裂解酶基 因algV1、algV2、algV3、algV4和 algV5。通过构建 5 个以pET一28a(+)为载体 的大肠杆菌表达质粒 pET28a—algV1、pET28a—algV2、pET28a—algV3、 pET28a—algV4和 pET28a—algV5，实现 了5个基 因的异源表达，并经海藻酸裂解酶定量和定性的活 性分析 ，确定5个基因的编码产物都具有海藻酸裂解酶活性 ，其 中重组的algV1、algV2和 algV3 为胞外酶，algV4和 algV5为胞 内酶。 关键词 ：解‘藻酸弧菌 ATCC17749；海藻酸裂解酶；大肠杆菌；异源表达；酶活测定 中图分类号 ：Q74 文献标志码 ：A CloningandIdentificationofAlginateLyasesGenesfrom VibrioalginolyticusATCC 17749 XUQing—qing， ZHUYun—xia， WANGKe—ping， YE Jiang， ZHANG Hui—zhan (StateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering，EastChinaUniversityofScienceandTechnology， Shanghai200237，China) Abstract：Findingnew sourcesofalginatelyasegenehadacertain scientificresearch significanceand potentialapplication value．In this study，five putativea|ginate lyase geneswere cloned from Vibrio alginolyticusATCC 17749accordingtomethodsofbioinformatics．Heterologousexpressionsoffivegenes inEscherichiacoliwereachievedbyconstructingfiveexpressionplasmidspET28a—algV1，pET28a—algV2， pET28a—algV3，pET28a—algV4，pET28a—algV5．Productscodedbyfivegeneswereverifiedtoownalginate lyaseactivity by qualitativeand quantitative determination． In addition，alginate lyasesgenesalgV1， algV2andalgV3wereextracellularenzyme，andalgV4andalgV5wereintracellularenzyme． Key words： Vibrio alginolyticus ATCC 17749；alginate 1yases； Escherichia coli； heterologous expression；activitydeterm ination 海藻酸 (Alginate)，又称褐藻胶