IL2基因修饰的树突状细胞诱导抗胰腺癌免疫效应的实验研讨.pdfVIP

华东地区第十届实验动物科学学术交流会 213 IL．2基因修饰的树突状细胞诱导抗 胰腺癌免疫效应的实验研究 乔伟伟1，顾坚忠2，杜卫东3 (1．复旦大学实验动物科学部，上海20032；2．中科院上海实验动物中心，上海201615； 3．上海市华东医院普外科，上海200040) 【摘要]目的将白细胞介素2(IL．2)基因修饰树突状细胞(DC)，观察其和对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗 作用。方法将IL．2基因转染单个核细胞来源的DC后，用于激发自体细胞毒性T淋巴细胞(CTL)， 检测其对CTL的增殖和人胰腺癌PC3细胞杀伤性的影响；检测CTL对荷人胰腺癌PC3细胞肿瘤 裸鼠肿瘤生长情况影响和对肿瘤细胞分裂指数和端粒酶活性的影响。结果IL．2基因修饰的DC 细胞所激发的CTL对胰腺癌PC．3细胞有较强的抑制作用，并能抑制荷瘤裸鼠肿瘤细胞的分裂指 数和端粒酶活性。结论IL．2基因修饰DC细胞激活的CTL抗PC．3肿瘤免疫作用明显增强，能 明显抑制人胰腺癌PC3细胞种植瘤的生长。 【关键词】树突状细胞；白细胞介素2；细胞毒性T淋巴细胞；胰腺肿瘤；细胞株 自细胞介素2(IL．2)作为T淋巴细胞的生长因子，对T淋巴细胞的激活、增殖和对B细胞和巨噬细胞活化 的过程所起到的作用已经明确。近年来，人们发现IL．2在树突状细胞(DC)生长发育过程中也起着重要的调节 l材料与方法 1．1实验动物 5—6周龄SPF级雌性BALB／cnu／nu裸鼠40只，体重18—20g，购自中科院上海实验动物中心 h光照和12h黑夜交替。 于无特定病原体(SPF)环境下饲养，12 1．2试剂 细胞所提供。 1．3方法 l。3．1DC的制备及转染取正常人外周血100 含10％的人AB型血清的RPMI1640和5％C023712下培养2h，轻轻洗出悬浮细胞，然后加入含GM．CSF 37。C下继续培养，每2天半量换 (800u／m1)、IL．4(500u／m1)及5％人AB型血清的RPMll640，在5％C02 X109 24 h，每2 pfu／ml 3×109 腺癌PC．3细胞株抗原250 d。收集各组细 ttl／ml，24h后换半量培养基，以后隔日半量换一次，培养7 胞用流式细胞仪鉴定细胞表型并经放射线照射灭活(soCo，300y)，备用。 214 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 用含IL．2(100 ml／孔) h。然后收集24 和96孔培养板(100gl／孑L)，按T细胞的1／10分别加入A组一H组，在5％C0237℃下培养72 kBq／孔) 继续培养12 靶比为50：1的比例、效靶共孵育时间24 及自发释放组(靶细胞+培养液)，测定每组上清CPM值。在加入T细胞之前，先以10倍靶细胞的量加 00％。 发释放组上清CPM值)／(最大释放组上清CPM值．自发释放组上清CPM值)水1 1．3．3胰腺癌裸鼠移植瘤模型的制定胰腺癌细胞株PC．3培养后，消化制成细胞悬液，以2×106个细 胞分别接种于40只裸鼠右侧腋窝皮下，移植后2周40只裸鼠皮下均可触及瘤块，移植后4周肿瘤生长至 约60 56d以各组DC激活的CTLlxlo