聚丙烯酰胺凝胶电泳快速显色方法的研讨.pdfVIP

! !二塑 实 验 室 科 学 第 15卷 第 6期 2012年 12月 CN12—1352／N LAB0RAT0RY SCIENCE Vo1．15 No．6 Dec．2012 聚丙烯酰胺凝胶电泳快速显色方法的研究 刘美艳，营孙阳，张 健，楚素芳 (江苏师范大学 生命科学学院，江苏徐州 221116) 摘 要：通过对聚丙烯酰胺凝胶电泳的固定方法、时间、染色液种类、染色方法及蛋白灵敏度的研究，确定 了以10％三氯乙酸为固定液 ，室温固定 lOmin的固定方法 ；染色液为：考马斯亮蓝 G一250、95％乙醇和 10％ 磷酸，染色时间为 15min；蛋白质灵敏度与考马斯亮蓝R-250相当，达到0．1Ixg。 关键词：蛋白质；电泳；染色；考马斯亮蓝 G一250 中图分类号：Q503 文献标识码：A doi：10．3969／j．issn．1672—4305．2012．06．023 Studyonrapidstainingprotocolsofproteinin polyacrylamidegelelectrophoresis LIUMei—yan，rINGSun—yang，ZHANGJian，CHUSu—fang (SchoolofLifeScience，JiangsuNormalUniversity，xuzhou221116，China) Abstract：Thefixingmethods，fixingtime，thekindofdyes，stainingprotocolsandthesensitivityof proteininpolyacrylamidegelelectrophoresiswerestudied．Thefixativesolutionwas10％ trichloroace- ticacidfixingfor10mininthenormaltemperature．ThestainingsolutionwasCBB G一250 ，95％ eth- anol，10％ phosphateandthestainingtimewas15min．Thecomparablesensitivityofproteinafter0p— timizationtoCBB G一250staining，whichisreaching0．1Ixg． Keywords：protein；electrophoresis；staining；CBB G一250 聚丙烯酰胺凝胶 电泳是分离蛋 白质常用的方 1 材料与方法 法，是大中专院校 “生物化学”与 “分子生物学”课程 1．1 实验材料 中的基础实验 J，也是生命科学研究领域中蛋 白 牛血清 白蛋 白(BSA)，低分子量 Marker(14．4 质分离鉴定常用的一个方法 一。电泳结束后 ，需 ～ 97．4Ku)由宝生物工程 (大连)有限公司生产。 要进行固定、染色和脱色。传统实验方法，通常用考 1．2 实验方法 马斯亮蓝R一250(CBBR-250)、甲醇和乙酸的混合 液进行同步固定与染色，然后脱色。该方法实验效 (1)固定液及染色液 果较好，但染色、脱色所需时间为24～48h ，当多 常规染色液：考马斯亮蓝 R-250(CBBR一250) 次重复试验时，所需的时间更长。因此需要对传统 0．1g，甲醇500mL，乙酸 100mL，蒸馏水400mL； 的染色和脱色方法进行改进，寻找染色时间短、凝胶 常规脱色液：乙酸 70mL，甲醇50mL，蒸馏水 背景颜色