聚乙二醇化粒细胞集落刺激因子的制备和表征研究.pdfVIP

聚乙二醇化粒细胞集落刺激因子的制备和表征 郑春杨翟艳琴 雷建都 马光辉 苏志国∗ （中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京100080） 摘 要 为了解决粒细胞集落刺激因子临床应用中的半衰期短、重复给药的问题。本文用N-羟基琥珀酰亚胺活 化法对单甲氧基聚乙二醇 (mPEG ，分子量20000) 进行活化，对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行化学 修饰，控制单修饰，常规离子交换层析对修饰产物进行分离纯化，得到高纯度的单修饰rhG-CSF 。采用SDS- PAGE 、SEC和多角度激光为手段，考察修饰产物分子量的变化情况，通过园二色考察修饰产物二级结 构的变化情况，并且通过动物实验考察聚乙二醇化粒细胞集落刺激因子的体内半衰期，结果表明：工艺具有良 好的重复性，产品明显延长了细胞集落刺激因子的半衰期。 关键词 重组人粒细胞集落刺激因子，聚乙二醇，化学修饰，半衰期 中图分类号Q511 文献标识码A PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF PEGYLATED GRANULOCYTE COLONY STIMULATING FACTOR Zheng Chunyang, Zhai Yanqin, Lei Jiandu, Ma Guanghui and Su Zhiguo (National Laboratory of Biochemical Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China) Abstract Monomethoxy Polyethylene Glycol(mPEG20000) was activated by N-hydroxysuccinimede and used to modify rhG-CSF. SDS, SEC-HPLC and MALLS determinations proved that the molecular size of rhG-CSF was greatly increased by PEGylation. The pure mono-PEGylated product was then subjected to the CD and half-life animal experiments. The results indicated the mono-PEGylated rhG-CSF was a candidate drug with long half-life. Key words rhG-CSF ，polyethylene glycol ，half-life, preparation, characterization 引 言 粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony Stimulating Factor, G-CSF)是刺激骨髓细胞 集落形成的集落刺激因子之一，能够特异性地刺激和调节粒细胞系统的增殖、分化、存活和活 化，主要用于治疗各种原因引起的中性粒细胞减少症[1]。但是 G-CSF 的临床应用存在体内半 衰期短，易被酶水解和肾脏清除，需要多次注射的问题，这不仅给患者带来了很大的不便，而 且重复注射也会引起一些不良反应。 聚乙二醇修饰(PEG modification)是用聚乙二醇衍生物修饰剂共价修饰蛋白质或多肽等生 物分子的过程[2]。聚乙二醇(PEG)具有良好的生物相容性、无毒性和无抗原性等优点，修饰后 的蛋白和多肽类药物的药代动力学和药效学性质能够得到改善，同时免疫原性降低，半衰期延 长，稳定性提高等[3,4]。 联系人：苏志国. 第一作者：郑春杨，女，26 岁，博士研究生. E-mail: zgsu@home.ipe.ac.cn 本文用N-羟基琥珀酰亚胺活化法对单甲氧基聚乙二醇 (mPEG，分子量20000) 进行活化， 对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行化学修饰，控制单修饰，常规离子交换层析对修 饰产物进行分离纯化，得到高纯度的单修饰 rhG-CSF。采用 SDS、SEC和多角度激 光为手段，考察修饰产物分子量的变化情况，通过园二色考察修饰产物二级结构的变化情况， 并且通过动物实验考察聚乙二醇化粒细胞集落刺激因子的体内半衰期，结果表明：工艺具有良 好的重复性，产品明显延长了细胞集落刺激因子的半衰期。