IL17、IL10基因和PRRS病毒E基因在真核表达质粒的构建研究.pdfVIP

猪传染病 在成熟的病毒粒子中N蛋白含量达20～40％。同种血清型间N蛋白非常保守，氨基酸同源 性达96～100％(美洲型)或94～99％(欧洲型)，但美洲型与欧洲型间氨基酸同源性仅为 57～59％，核营酸序列一致性约63％，与本实验分析结果一致。N蛋白是PRRSV的主要免 N．墓冈缺失片段的表达产物进行发应，结果表明，4个MAbs识别到了两个非连续的抗原表 化．能于前78个氨基酸残基中；另外3个MAbs识别到一个共同的抗原表位，位于N蛋白 中部的50～66位氨基酸残基上，且该区域为N蛋白亲水性最高的区域。N蛋白N．端有两段 氨基酸，主要功能除连接并包裹基因组RNA外，还能作为两个潜在的定位信号，在N蛋白 运输过程中起方向定位作用pj。二级结构分析证明，C．端112～l17位氨基酸形成p链，是 N蛋白构象依赖性抗原决定簇不可缺少的，C．端微小的变化，如缺失或突变，都会影响N 蛋白合成【4】。N蛋白可形成二聚体，有利于病毒粒子的稳定。N蛋白上的抗原决定簇具有种 和型的特点，有的对所有的PRRSV共同保守，有的仅对欧洲型或美洲型是特异性【5】。Yang 等Ib】应用美洲型毒株N、M、GP5、GP3蛋白研制的11个单克隆抗体进行分型，3个N蛋白 单克隆抗体将美洲型毒株和LV株划分为5个抗原型。通过Western免疫印迹实验证明，猪 感染PRRSV后最早出现(大约7天)的是针对N蛋白的抗体，且该抗体可持续存在半年以 上，因此N蛋白可作为PRRSV抗体的检测抗原，无论早期还是晚期都有重要的诊断学意义。 本实验利用构建的pET-32a-N重组质粒高效表达出大小约35kDa重组核衣壳蛋白，推 测原因重组蛋白可能为一种磷酸化的融合蛋白。重组蛋白带有组氨酸标签，便于进行纯化， 为今后制备标准化的抗原，建立以重组N蛋白为包被抗原检测PRRSV的诊断方法打下基础， 对丁．PRRSV的防治具有重要意义。 参考文献略 IL．17、IL．10基因和PRRS病毒E基因 在真核表达质粒的构建 陆芹章梁媛熊艳芸罗廷荣4 广西南宁市广西大学动物科学技术学院(530004) 摘要：猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪 呼吸道疾病为特征的传染病。该病自发现以来给世界各国秦猪业造成了巨大的经济损失．本研究从实验室 IL17质粒，通过PCR及酶切鉴定表明， plRESneo—E—IL·10质粒、共同表达IL-17与E基因的plRESneo…E 成功构建了上述三个真核表达质粒。 关键词： 白细胞介素．17 白细胞介素．10PRRSV的E基因 PRRS是最近20年来才发展起来的一种严重威胁养猪业的重要疾病之一，它给养猪业 带来了灾难性的经济损失；它以母猪发热、厌食和流产、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔 猪的呼吸道症状和高度死亡率为特征，是具有高度传染性的病毒性疾病。为了有效控制该病， 研究PRRS病毒的免疫应答机理已成为目前研究的热点。已有研究表明机体对PRRS病毒感 染的免疫应答是一把双刃箭，一方面通过免疫反应产生对PRRS病毒的抵抗力，另一方面可 造成机体免疫系统的损伤，引起免疫抑制，增加机体对继发感染的易感性。而且PRRSV感 染引起体内一系列与细胞免疫有密切关系的变化已经逐渐获得研究者们的共识，自上世纪 80年代以米，虽陆续对细胞因子进行了克隆和研究，但关于猪细胞因子及其网络在病原致 病过程中或在机体病理损伤及免疫应答过程中的作用机制还不清楚；猪细胞因子赖于发挥作 朋的受体的相关研究资料仍很缺乏；细胞因子在疾病预防和治疗中的应用及其作用机理尚处 丁-探索阶段等，目前许多参与细胞免疫的因子与PRRSV的关系还不清楚，这些问题有待进 一步的深入研究，相信通过研究，必定在揭示病原的致病机理、机体免疫机理、疾病的预防 第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会2006年会议论文集 等诸多领域有重要的理论和实践意义。为了从细胞免疫的角度对PRRSV进行预防，必须进一 步了解该病原与其它一些细胞因子之间的相互作用。 白细胞介素(Interleukin；IL)简称白介素，是80年代以来发现的一类细胞因子，其化学成分 为多肽或糖蛋白。IL种类很多，它们都是人类或动物的各种细胞分泌的，具有