SHIP基因在白血病发病机制中作用的研究.pdf

中文摘要 SHIP基因在白血病发病机制中作用的研究 摘 要 背景：白血病是原发于造血系统的恶性肿瘤。近年来，其发病率呈 增加趋势。在35岁以下人群中，白血病的死亡率占恶性肿瘤第一位，严 重危害中青年人的生命，所以值得特别重视。急性白血病的发生包括了复 杂的基因突变、缺失、癌基因激活及抑癌基因失活等多种分子生物学水平 的异常。尽管许多基因在白血病发病中的作用及其机制已初步明确，但所 有的基因异常仍不能解释全部白血病的发生机制，因此，寻找新的白血病 相关基因并研究其生物学功能一直是白血病研究领域的热点之一，不仅有 助于阐明白血病发生发展的机制，而且可能找到一些治疗靶位点。 SHIP基因是继PTEN之后发现的仅在造血细胞表达的一种新的肌醇 本课题组多年来一直围绕SHIP基因功能与白血病发生发展关系开展研究 工作，取得了一系列有意义的研究成果。我们首次报道急性白血病患者存 在SHIP基因突变，并证实SHIP基因低表达和表达缺失与人白血病细胞 SHIP蛋白重新表达并可以逆转细胞的异常增殖表型，近年来也陆续发现 和报道了一些白血病细胞中新的SHIP基因突变。这些都提示SHIP基因 具有调控白血病细胞增殖、凋亡的结构基础。但是，有关SHIP基因调控 的调控有何改变等问题，目前国内外均无报道。本研究的目的是：(1)探 白表达水平的影响；(2)构建携带突变型SHIP基因的慢病毒载体并转染 进一步研究SHIP基因在白血病发病机制中的作用提供实验依据。 第一部分野生型SHIP基因对白血病细胞系K562增殖凋亡的实验研究 目的探讨肌醇5，磷酸酶基因SHIP对人白血病细胞系K562增殖、 中文摘要 凋亡及细胞周期的影响，并对其可能的作用机制进行初步探讨。 方法将携带有野生型SHIP基因和空载体的慢病毒表达载体转染人 白血病细胞系K562。MTT检测细胞生长情况；流式细胞仪检测细胞转染 效率和细胞周期分布；显微镜及透射电镜下观察细胞形态及超微结构改 mRNA 殖及凋亡情况。实时荧光定量PCR(FQ—PCR)检测转染前后SHIP 表达变化，Western Bcl．2、Bax、Bad、Bcl．xL、CyclinDl、p27 活性检测试剂盒检测NFKB活性变化。 结果 1 转染48h后，流式细胞仪检测慢病毒载体转染K562细胞效率为 (74．6+5．8)％。FQ—PCR矛DWestem SHIP呈高效表达，表明转染成功。 低，克隆形成能力降低，DNA合成减少和凋亡增多，与转染空载体组和 未转染组相比有统计学差异(尸O．01)。 3 4 0．323+0．025，Akt473：0．788+0．1 平均无统计学差异(PO．05)。 5 对照组呈下降趋势，而总Akt表达水平无明显变化；撤除IL．3刺激后， 酸化水平下降缓慢，持续时间较长。 6 中文摘要 D1蛋白表达 D1 D1：0．221+0．031) Dl：0．228+0．033) 与未转染组(p27：0．152+0．022；p2l：0．182土0．034；cyclin 相比无明显改变。 7野生型SHIP基因对凋亡相关蛋白表达的影响 增 加 ： 32．82+5．80 ； ： [caspase一9 nmol／(h·rag)caspase一3