实验五. 细胞染色体制备.pptVIP

实验步骤 1.秋水仙素预处理: 收集生长旺盛的细胞1ml，轻轻吹打散，加入秋水仙素1ul，继续培养6-8小时（已完成）； 2. 预处理后的细胞，以1000rpm离心5min，去上清； 3. 低渗处理：加入1ml低渗液，轻轻吹打，使细胞重悬，然后补加7ml低渗液，室温下静置20min 4. 预固定：加入3-4滴固定液后，轻轻混匀，避免粘连，1000rpm离心5min，去上清； 5. 固定：沿管壁慢慢加入3ml固定液，2min后用吸管轻轻吹打，使细胞分散，固定10min后， 1000rpm离心5min，去上清； 6. 二次固定：加3ml固定液，吹打均匀，固定10min后，1000rpm离心5min，去上清； 7. 三次固定：重复第6步； 8. 制悬液：去上清后剩0.5ml固定液，用吸管轻轻吹打使其成为细胞悬液； 9. 滴片：将冰冷的载玻片倾斜30℃，吸取细胞悬液距离载玻片至少1m滴于载玻片上，吹散，空气干燥； 10. 染色：在干燥的载玻片上滴Giemsa，染色10min，细水冲洗后，空气干燥； 11. 镜检：在低倍镜下寻找染色体分散良好、染色适中的分裂相，油镜下观察染色体形态并计数。 * 组织培养细胞染色体的制备 实验五 实验目的 实验原理 实验试剂与仪器 实验步骤 注意事项 了解组织细胞的培养方法。 掌握染色体标本的制备方法。 一、实验目的 二、实验原理 二