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实验十二 药物研制工艺 ——细胞色素C的制备及测定 刘艳丽 生科院249室 一、目的要求： 掌握从心肌中提取细胞色素C的原理；学习测定细胞色素C含量的方法；了解细胞色素C活性测定方法。 二、原理： 细胞色素是一类含铁卟啉基团的电子传递蛋白，只存在于需氧细胞中，在线粒体内膜上起传递电子的作用。细胞色素C是细胞色素的一种，是一种稳定可溶性蛋白，易溶于水及酸性溶液，故常用酸性水提取。可分为氧化型和还原型两种，氧化型水溶液呈深红色，还原型水溶液呈桃红色。其含量与组织的活动强度成正比。以哺乳动物的心肌、鸟类的胸肌和昆虫的翼肌含量最多，肝、肾次之，皮肤和肺中最少。 本实验以猪心肌为原料经过酸溶液抽提，人造沸石吸附及三氯乙酸沉淀得到细胞色素C粗制品。根据还原型细胞色素C在520nm有最高吸收峰，利用分光光度计测定其含量。 三、试剂： 1、制备用试剂 1mol/L硫酸；1mol/L氨水；人造沸石60-80目；0.2%氯化钠溶液；25%硫酸铵溶液；20%三氯乙酸；奈氏试剂或10%氯化钡溶液。 2、测定用试剂 标准细胞色素C溶液（80mg/mL）；连二亚硫酸钠。 四、器材： 新鲜或冰冻的猪心、离心机、分光光度计、层析柱、透析袋、尼龙纱布。 五、工艺路线： 六、操作方法： 1、细胞色素C的制备 （1）绞碎、提取、压滤：将猪心绞碎后，称取100g肌肉糜，加入200mL水，