文心兰ACC氧化酶基因OnACO1克隆与表达分析.pdfVIP

热带作物学报 2014，35(4)：693—699 ChineseJournalofTropicalCrops 文心兰ACC氧化酶基因 OnACO1克隆与表达分析 杨光华 ．一．刘进平 1海龚南大学南作物大资源保摹学与开发农教育学点实验焘院海南海口570228 2 三亚市南繁科学技术研究院．海南三亚 572000 摘 要 以文心兰切花品种 “黄金 2号 ”(Onci·dium GowerRamsey G‘old2’)为材料 ，通过 RT—PCR和 RACE技 术．从文心兰的花中分离得到了1个ACO基因成员的cDNA，命名为OnAC01(GeneBank登录号为JQ822088)。 该基 因全长为 1424bp，包括 972bp的ORF，172bp的5-UTR和280bp的3-uTR，编码 324个氨基酸，其氨 基酸序列与石斛兰等兰科植物的ACO氨基酸序列有较高的同源性。构建原核表达载体 pGEX—OnACO1，转化大 肠杆菌 BL21进行诱导表达 ．在 SDS—PAGE中显示 出了特异性表达条带，与预测 的蛋 白大小一致。荧光定量 PCR 分析表明OnAC01基因的表达具有组织特异性 ．主要在蕊柱中表达 ，并且 乙烯对该基 因的表达有上调作用 。 关键词 文心兰 ：OnACO1：RACE；基 因克隆；表达分析 中图分类号 Q75 文献标识码 A Cloning and Expression AnalysisofOnACO1Gene in Oncidium YANG Guanghua ．LIUJinping 1KeyLaboratoryofProtectionandDevelopmentUtilizationofTropicalCropGermplasmResources， HainanUniversity,MinistryofEducation~CollegeofAgronomy,Hainna University,Haikou，Ha#tan570228，China 2SnayaScience c^∞zp昌yAcademyforCropWinterMultiplication，s∞ Hainan572000，China Abstract A memberofACO genefamily，OnACO1(GeneBankaccessionnumberJQ822088)wasclonedfrom Oncidium GowerRamsey G‘old2 ‘by RT—PCR and RACE technology．The fulllength cDNA is 1424bpwith an ORF of972bpencoding324amino acids，a 172bp 5-UTR anda 280bp 3 UTR．The deduced amino acid sequence of OnAC01 shares high homology with those of other orchid species．Vector pGEX—OnACO1 was constructed and transformed into col BL21．Prokaryotic expression and SDS—PAGE indicated thata specific bandofOnAC01expressionwasinconsistentwiththepredictedproteinsize．QuantitativePCR analysisshowed there was a tissue—specific pattern of OnACO1 expression，mainly in gynostemium，and the expression was upregulated by ethylene． Key words Oncidium ；OnACO1；RACE；Gene cloning；Expression analysis doi 10．3969／j．issn．10