饲料中克仑特罗免疫亲和色谱—气质联用检测方法的研讨.pdfVIP

农业与林业 413 饲料中克仑特罗免疫亲和色谱一气／质联用检测方法的研究 王 迪1 杨曙明①1 张 波2 宋 荣1 熊勇华2 杨晓慧2 1．中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京市，100081； 2．北京中德大地食品安全技术开发有限公司，北京市，100081 摘 要 以克仑特罗单抗为配基制备免疫亲和色谱柱，建立了简单、快速、特异的样本净化 技术，动态柱容量达到200ng／mL基质。饲料样品经超声及萃取后，经免疫亲和柱纯化，再用 GC／MS检测，建立了免疫亲和色谱一气／质联用(IAC—GC／MS)方法。空白猪尿添加浓度为 8．5)％，(78．6±7．7)％，偶联非特异抗体的对照组亲和柱对样品保留值为5．55％。方法的最低 检测浓度为0．004ptg／g。数据表明：免疫亲和柱作为提纯方法，与统固相萃取提纯方法相比平行 性好，提纯后样本杂质少。本文建立的检测饲料中克仑特罗的IAC-GC／MS法为国内初次报道。 关键词 免疫亲和柱兴奋剂 克仑特罗 净化 部疾病，研究发现其在动物饲养中具有促进肌肉生长，减少脂肪堆积，提高饲料利用率的作用，被称为“瘦 肉精”。但是克仑特罗在动物体内残留量大，时间长，给公众健康带来极大负面影响。人类食用132兴奋剂 残留的肉产品在西班牙、法国、意大利、中国等都曾爆发过中毒事件。目前全世界已经将克仑特罗列为违 禁药物，禁止在任何动物饲养中添加。在我国对克仑特罗的违法使用屡禁不止，因此查处任务非常繁重。 对于克仑特罗等8兴奋剂的检测方法主要有免疫分析法、高效液相法、液质联用及气质联用法。使 用仪器定量检测，需要对样本进行复杂的前处理。目前使用较多的传统提纯方法十分烦琐且费时，而免 疫亲和色谱(ImmunoAffinity 体偶联于惰性基质，制备固相萃取柱(SPE)，利用抗原抗体特异、可逆结合特性，从复杂的待测样品中识 别目标化合物，而杂质则流出IAC柱，洗涤除去杂质后，最后用洗脱液将抗体与目标物解离，则洗脱液 中为纯化样品。此法可以节省时间，简化前处理过程，减少有机溶剂使用量，提高检测灵敏度，排除样品 中杂质的影响。 一、材料和设备 (一)主要仪器 ①通讯作者；杨曙明。研究员。博士。中国农科院农业质最标准与检测技术研究所，主要从事兽药免疫检测及农产品质量与食物安 全方面研究。联系电话：010 4王垂 第五届博士生学术年会论文集 石浦海天电子仪器厂)，Aglient1100气质联用仪(美国安捷伦公司)。 (二)实验材料 4B 胶(Amersham，英国)；盐酸克仑特罗单抗，免疫亲和柱及配套装置(由北京中德大地食品安全技术开发 有限公司提供)。 8．30．1M 溶液配制：凝胶活化缓冲液：pH9．50．1mol／LNa2C03；偶联缓冲液：pH NaHCOs；凝胶偶联 4．0 NaAc-HAe- 8．00．1mol／Lnis—HCl—o．5mol／LNaCl，凝胶偶联洗液B0．1mol／L 洗液A：pH pH 8．0 7．2 0．5mol／LNaCl；凝胶封闭液：pH0．1mol／L聪s—HCl；亲和柱缓冲液：pH0．02mol／I。磷酸盐缓冲液 7．2 (PBS)；淋洗液：pH 7．2 pH)；亲和柱储备液：pH0．02mol／LPBS。农业行标NY438—2001中所列所有试剂及材料。 二、实验方法 (一)免疫吸附剂制备 抗体与凝胶偶联：取4C下浸泡于活化缓冲液的Sepherose4B胶。以0．59／mL干胶体积的比例称 取溴化氰，溶于3倍胶体积活化缓