饲用木聚糖酶基因的克隆及序列分析研究.pdfVIP

中国饲料 2013年第 4期 饲用木聚糖酶基因的克隆及序列分析 四川农业大学生命科学与理学院 韩学易 李治国 陈 惠 f摘要1以实验室 自行 分离筛选 出的产木聚糖 酶短 小芽孢杆 菌HZ-01的基 因组DNA为模板 ，采用PCP,．方法扩 增得到一条含有木聚糖酶基因的DNA片段，对其进行序列比对及生物信息学分析，结果表明，该基因全长为687bp， 编码228个氨基酸 ，理论分子质量约为25kDa，存在 4个潜在的N一糖基化位点，密码子使用存在偏爱性。 关『键词】短小芽孢杆茵 ；木聚糖酶 ；克隆；序列分析 【中图分类号】$816．32 文【献标识码]A 文【章编号】loo4—3314(2Ol3)04—0016—02 [Abstract1A xylanasefrom BacilluspumilusHZ一01wascloned．sequencedandbioinformaticsanalysied．rheful1一 length DNA contained an open readingframeof687 nucleotides．encoding228 amino acids．Thepredicted molecular weightoftheproteinwas25kDa．PotentialN-glycosylationsitesidentifiedbyNetNGlyc 1．0server．Thepredictedshowed that：thematurexylanasewould like contain 4 N—glycosylation sites．Analysisofthecorrelation between synonymous codonbiasandgeneexpressionlevelrevealedastrongusagebias． K【eywords】Bacilluspumilus；xylanase；cloning；sequenceanalysis 木聚糖酶属于水解酶类 。是一类可以将木聚 均为国产分析纯试剂。 糖降解成低聚木糖或木糖的复合酶系(苏玉春等 ， 1-3 木 聚糖酶基 因的扩增 以短小芽孢杆菌 2008)。目前研究和应用较多的木聚糖酶多是来源 HZ一01基因组 DNA为模板 ．根据网上木聚糖酶 于细菌、真菌和放线菌。较真菌所产木聚糖酶而 基因序列设计引物 ： 言．细菌所产木聚糖酶具有更好 的热稳定性 (Pan— Upl：5 一‘CTG丌GTTTGTGATGTGTATTG一3’： bangred等 ，1983)。本文报道了来 自短小芽孢杆菌 Down1：5一‘TTAGITGCCAATAAACAGCT-3’。 HZ一01产木聚糖酶基因的克隆及其序列分析，为 PCR扩增体系 ：总 DNA 1 L，上下游引物各 下一步木聚糖酶的异源表达及其产业化应用奠定 l L，2X Taq PCR MasterMix 12．5 IxL，ddH20 良好基础 。 9．5 L，总体积 25 L。PCR扩增条件 ：94℃预变 1 材料和方法 性 2min，94℃变性 1min，55℃退火 50s，72℃ 1．1 栽体与菌株 短小芽孢杆菌 HZ一01由本实 延伸 1min，30个循环，最后 72℃延伸 4rain。电 验室 (四川农业大学生物化学与分子生物学实验 泳检测 PCR扩增产物 ，纯化 回收，连接到 T载体 室)自行筛选 ；大肠杆菌DH5et为本实验室保存 ； 上 ，转入感受态细胞 ，菌落 PCR鉴定阳性转化子。 pMD19一T载体购于TaKaRa公司。引物合成和基 DNA测序 由北京诺赛基因组研究有限公司完成。 因测序由上海英骏生物技术有限公司和北京诺赛 1．4 木聚糖