拟除虫菊酯类农药通用抗体制备及高效氯氟氰菊酯免疫检测技术研究.pdfVIP

拟除虫菊醋类农药通用抗体制备及高效氯氟氰菊醋 免疫检测技术研究 摘 要 农药残留免疫检测技术是国内外小分子快速检测的重要内容。本文针对拟除虫菊 醋类农药制备通用抗体。以拟除虫菊醋类农药的中间体一一间苯氧基苯甲酸为半抗 原，用活性醋法在间苯氧叁苯甲酸的数塞目末端偶联载体蛋白BSA作为免疫杭原，用混 合酸醉法在其戎墓末端偶联载体蛋白OVA作为ELISA反应的包被杭原.用UV-2401Pc 型号的紫外分光光度计对合成的人工杭原、BSA,OVA以及半杭原进行全波长扫描，鉴 定人工杭原偶联成功与否，经过扫描鉴定，偶联物在280nm处的紫外吸收峰型与单一 蛋白吸收峰型的变化比较，可以初步判断偶联成功。 用上述制备的人工抗原PBA-BSA作为免疫杭原，制备#0631,40629,#0977杭血 清。抗血清效价测定依次达到1:204800,1:819200,1:409600。用#0629血清确 定杭原抗体工作浓度，杭原工作浓度为6pg/mL,杭体工作浓度为血清稀释6000倍。在 此工作浓度下，用9种拟除虫菊醋进行交叉测试，抗体可以识别高效氛氟氰菊醋，氰 戊菊醋，氛菊醋和百树菊699等几种农药.以高效氛氟氛菊醋为研究对象，检测的标准 曲线方程为 Y=-0.8129X+2.3439,R=0.9965.I,。为 0.76mg/ml.检测线性范围 1-100001eg/mL.检测精确度用微量板的批内和批间误差表示。批内变异系数为CV=4.7%, 批间平均变异系数为CV=4一7.1%, 用高效氛氟氛菊醋时BLISA检测条件优化，抗原工作浓度为6Mg/mL，杭体工作浓 度血清稀释6000倍。反应体系封闭液1%OVA，封闭时间2h,离子强度0.2一0.3M，有 机溶剂 (甲醉，丙酮)浓度10%,pH值的适宜范围为 7一9，反应温度 37C，时间 1h,TMB显色时间10Min. 关键词:拟除虫菊醋;杭原;多克隆通用杭体;EL工SA ANTIBODYAGAINSTAFAMILYOFPYRETHROIDWAS PREPAREDANDTHERESEARCHONIMMUNOASSAY TECHNOLOGYFORPESTICIDECYHALOTHRIN ABSTRACT Immunologicalanalysistechniqueisanimportantmethodfordetectionofthe pesticideresidueintheworld.Inthiswork,polycolonalantibodiesagainstafamiliyofthe pyrethrinswidelyusedinourcountrywereprepared.Theconfigurationanalogywith pyrethroidwassynthesizedfromtheintermediateof3-Phenoxybenzoicacidasthemajor materials,theimmunogenantigenconjugateswerepreparedbylinkingthePBAtobig proteinmolecularofbovineserumalbumin(BS幻withNHS/DCC,thecoatingantigen conjugateswerepreparedbylinkingthePBA tobigproteinmolecularof ovalbumin(OVA)withmixedanhydridemethod(MA),thecouplingreactionwasconfirmed asuccessbyUV-visiblelightspectrumscanning. Antibody#063140629#0977werepreparedagainstthecoupledPBA-BSA,andtheir antiserumgradientriched2.0x105,8.2x105,4.1x105respectively;thecross-reactionrate totheotherPyrethroidpestcides,thepolycolonalcanrecognizesomekindsofPyrethroid, suchascyhalothrin,permethrin,cypermethrin,fenvale