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两种果蝠微卫星位点的筛选及通用性研究 作者：邵伟伟 指导老师：周善义教授 陈金平副研究员 张树义教授 年级：2005 级 专业：动物学 研究方向：动物分子生物学 摘要 棕果蝠(Rousettus leschenaulti) 、大长舌果蝠（Eonycteris spelaea ）主要分布于我国的热 带和亚热带地区，对当地的龙眼、荔枝等水果种植业造成巨大危害。近年来，棕果蝠在国内 被大范围捕杀，造成其种群数量急剧下降。棕果蝠、大长舌果蝠在生态系统中对经济植物传 花授粉和种子传播起着重要的作用，所以研究这些物种的种群遗传结构和种群变化对更好的 保护该物种提供基础资料。 为了获得用于研究棕果蝠、大长舌果蝠的种群结构和遗传多样性的分子标记，我们利用 探针富集法分别构建了棕果蝠和大长舌果蝠的微卫星基因组文库。筛选出棕果蝠的 11 个高 度多态性位点（M3-1 、M3-3 、M3-120 、M3-8 、M3-6 、M3-121 、M4-2 、B04 、D04-2 、D10-2 、 D12-2 ），并在广西种群的57 个棕果蝠个体中检测。运用GENEPOP 3.4 软件进行哈迪-温伯 格平衡和连锁不平衡检测。结果表明，这 11 个位点在广西种群中均符合 Hardy-wenberg 平 衡，并且不连锁。筛选出大长舌果蝠9 个位点（DC3D6 、DC205 、DC322-3 、DC631-2 、DC618 、 DC615 、DC645-3 、DC683-2 、DC636-2 ），并在一个云南种群39 个大长舌果蝠个体中检测。 除了引物DC618 外，其余8 对引物扩增片段显示有高度多态性（大于7 个等位基因）。哈迪 -温伯格平衡检测指示在两个位点 DC631-2, DC683-2 上有严重的杂合度缺失，Bonferroni correction for multiple tests 显示P 0.0071 ，并MICRO-CHECKER 软件对这两个位点分析存 在零等位基因。GENEPOP 3.4 软件检测显示9 个位点不连锁。 此外，分别检测了上述分离到的位点在其他果蝠种群中的通用性。10 对棕果蝠特异的 微卫星引物（M3-1 、M3-3 、M3-120 、M3-8 、M3-6 、M3-121 、B04 、D04-2 、D10-2 、D12-2 ） 在其它4 种果蝠（短耳犬蝠、犬蝠、大长舌果蝠、小长舌果蝠）内的通用性，其中，8 对引 物能在大长舌果蝠中扩增出相应大小的产物，短耳犬蝠中能获得预期大小产物的引物有 5 对，犬蝠有2 对，而小长舌果蝠只有1 对能适用。而9 个大长舌果蝠特异的微卫星标记在犬 蝠中，其中只有2 对引物（DC615 、DC618 ）能扩增出特异的条带。 这些微卫星标记为果蝠种群遗传学研究提供了更多的工具。 关键词：大蝙蝠亚目；棕果蝠；大长舌果蝠；微卫星；近缘种；通用性 I The Isolation of Microsatellite Loci in Two Species of Fruit Bat and Their Applicability in Closely Related Species Author: Shao Weiwei Grade: 2005 Speciality: Zoology Research Area: Zoology Molecular Biology Supervisor: Prof. Zhou Shanyi Associate Prof. Chen Jinping Prof. Zhang Shuyi Abstract Rousettus leschenaulti and Eonycteris spelaea are mainly distribute